PEG3350溶液(50%,無菌)

產(chǎn)品名稱：PEG3350溶液(50%,無菌)
規(guī)格：100ml/500ml
供應(yīng)商：上海遠(yuǎn)慕生物
分類：細(xì)胞培養(yǎng)
儲存條件：室溫,12個(gè)月
用途：聚乙二醇誘導(dǎo)細(xì)胞融合，可用作融合劑,以獲得生產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞,誘導(dǎo)細(xì)胞雜交。也可用于酵母轉(zhuǎn)化。
注意事項(xiàng)：無菌溶液,由DPBS(pH7.4)和PEG33500或稱聚乙二醇3350組成,經(jīng)無菌處理。體外培養(yǎng)的單層貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞均可以做融合，但成功概率較大的是單層貼壁細(xì)胞。




酵母感受態(tài)細(xì)胞的制備：
1.活化菌種。-80℃保存的菌種在固體YPDA培養(yǎng)基（YPDA加20g Agar/L）上劃線，在30℃培養(yǎng)2-4天。
2.挑取酵母單菌落在固體YPDA培養(yǎng)基上劃3-5 mm的短線，在30 ℃培養(yǎng)2-4天。待酵母單菌落長至2 mm長時(shí)，接種。
3.首先把酵母細(xì)胞接種到3 ml液體YPDA培養(yǎng)基中，30℃過夜培養(yǎng)。
4.第二天轉(zhuǎn)接到含有30 ml液體YPDA培養(yǎng)基的三角瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，待OD600到0.4-0.5范圍內(nèi)。收集細(xì)胞，1000 g，離心5 min, 去上清。
5.沉淀用30-50 ml的無菌的去離子水懸浮。1000 g，離心5 min，去上清。
6.沉淀用合適體積的100 mM LiAc懸?。?0 ml的酵母菌最多用不超過1 ml的100 mM LiAc懸浮，通常100 μl的酵母細(xì)胞用于轉(zhuǎn)化一個(gè)質(zhì)粒，即一個(gè)反應(yīng)）。
7.把酵母細(xì)胞的懸浮液分裝到1.5 ml的離心管中，每管分裝100 μl，用于轉(zhuǎn)化一個(gè)質(zhì)粒即一個(gè)反應(yīng)。1000 g，離心5 min，去上清。制備好的感受態(tài)細(xì)胞備用。

酵母轉(zhuǎn)化：
1.配制預(yù)混液，每轉(zhuǎn)化一個(gè)質(zhì)粒即一個(gè)反應(yīng)需要360 μl的預(yù)混液。

50% PEG	240 μl
1 M LiAc	36 μl
Carrier DNA（10 mg/ml）	5 μl
質(zhì)粒（大約200 ng/μl）	5 μl（根據(jù)質(zhì)粒的濃度加入相應(yīng)的體積）
總體積	360 μl

2.吸取360 μl的預(yù)混液加入到感受態(tài)細(xì)胞中，用槍頭反復(fù)吹吸沉淀，使離心管底的酵母細(xì)胞徹底地懸浮在含有PEG的預(yù)混液中。
3.放置在30 ℃的水浴鍋中孵育30 min，每10 min混勻一次。
4.放置在42 ℃的水浴鍋中熱擊30 min，每10 min混勻一次。
5.12000 rpm，離心1 min，去掉上清液。
6.沉淀中加入100 μl的無菌的去離子水，懸浮沉淀。
7.把酵母細(xì)胞涂到相應(yīng)的酵母培養(yǎng)基平板上，30℃培養(yǎng)2-4天。


注意事項(xiàng)：
1. 初次使用Carrier DNA，請把裝有Carrier DNA的管子在沸水中煮沸5 min，然后立即放在冰上，用后放在-20℃儲存?zhèn)溆?。下次使用時(shí)請?jiān)诒辖鈨鯟arrier DNA。
2. PEG溶液在低溫環(huán)境下會(huì)析出，請于常溫環(huán)境下完全溶解后使用。
3. 轉(zhuǎn)化全程要無菌操作。


注意事項(xiàng)
1．避免接觸眼睛、呼吸系統(tǒng)、皮膚；若誤接觸眼睛，立即用水沖洗或向醫(yī)生咨詢；
2．由于組織或細(xì)胞性質(zhì)不同，實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)依據(jù)具體情況，確定**消化時(shí)間；消化細(xì)胞時(shí)間不宜過長，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁和生長狀況；
3．本產(chǎn)品不含抑菌劑，在使用過程中要特別注意無菌操作，避免消化液被微生物污染，大包裝，建議無菌分裝保存；
4.為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。



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遠(yuǎn)慕生物訂購流程如下：
1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨，一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。
2、部分非常用產(chǎn)品，需提前1-2日預(yù)訂，海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。
3、部分產(chǎn)品價(jià)格會(huì)因貨期、批次等因素發(fā)生變化，若有變動(dòng)以訂貨當(dāng)日價(jià)格為準(zhǔn)。
4、每日訂單截止時(shí)間為18點(diǎn)整，部分城市可到19點(diǎn)整，因超過截止時(shí)間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
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