PEG1500溶液(50%,無菌)

【PEG1500溶液(50%,無菌)】說明

【信息說明】

產(chǎn)品名稱：PEG1500溶液(50%,無菌)

供應商：遠慕生化試劑廠家

規(guī)格：10ml 5×10ml

分類：細胞培養(yǎng)

儲存條件：4℃,6個月

用途：聚乙二醇可用作融合劑,以獲得生產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤細胞,誘導細胞雜交，同sigma10783641001。

注意事項：無菌溶液，由HEPES和PEG1500或稱聚乙烯醇1500組成,經(jīng)過濾除菌。

【簡介說明】

PEG1500溶液(50%,無菌)可用作融合劑，以獲得生產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤細胞，誘導細胞雜交，該試劑同sigmaP7181產(chǎn)品，經(jīng)嚴格無菌處理，僅用于科研領域，不用于臨床診斷或治療。

聚乙二醇(Polyethyleneglycol,PEG)有眾多品種，常見的有PEG400、PEG1500、PEG4000、PEG6000、PEG8000等，聚乙二醇系列產(chǎn)品無毒、無刺激性，味微苦，具有良好的水溶性，并與許多有機物組份有良好的相溶性，具有優(yōu)良的潤滑性、保濕性、分散性、粘接劑、抗靜電劑及柔軟劑等。

分子量200～600者常溫下是液體，分子量在600以上者就逐漸變?yōu)榘牍腆w狀，隨著平均分子量的不同，性質也有差異。從無色無臭粘稠液體至蠟狀固體。隨著分子量的增大，其吸濕能力相應降低。其中PEG4000和PEG6000常用于促進細胞融合或原生質體融合并有助于生物體(如酵母菌)在轉化中攝入DNA。

【操作步驟】

1、如果變成膠凍狀,可37~60℃水浴使其變成溶液。

2、單層貼壁細胞:將雜交前體細胞以相同數(shù)量(5×104/ml)接種,以適當?shù)呐囵B(yǎng)基培養(yǎng)細胞,待細胞貼壁擴展至匯合成片(80%匯合率)的密度。

3、吸干培養(yǎng)液,加入PEG1500溶液(50%,無菌),輕輕轉動1min使PEG1500溶液覆蓋所有細胞。

4、靜置1min,加入5ml完全MEM培養(yǎng)液以稀釋PEG1500溶液,棄上清液，用補加1×HT和1×A的完全培養(yǎng)液重新懸浮細胞。

5、融合12~24h后進行異核體分析，雜交前體細胞在4~5天內發(fā)生死亡，對于大多數(shù)融合前體細胞而言，10~14天可見雜交細胞克隆。

6、懸浮細胞：將兩種不同親體的細胞各1ml(約為1×107)混勻，離心以沉淀雜交前體細胞，棄上清液，使之剩余約1ml，手指輕彈管底或手搖離心管使兩種細胞混勻并重新懸浮。

7、1000g離心，棄上清液，加入完全MEM培養(yǎng)液以稀釋PEG1500溶液，吸干凈稀釋的PEG1500溶液；用無血清MEM培養(yǎng)液，手搖離心管重懸細胞(不要破壞細胞)，1000g離心5min，棄上清液，重復1次該步驟。

8、加入含有20%的胎牛血清的HAT選擇培養(yǎng)液，混勻，將細胞懸液用培養(yǎng)液稀釋至5×104/ml,接種于96孔板(每孔0.1ml)或其他器皿中，37℃5%CO2孵育過夜后選出融合細胞。

【注意事項】

1、應注意無菌操作，避免被微生物污染。

2、PEG1500溶液較為粘稠時，可37~60℃水浴使其變成溶液。

3、體外培養(yǎng)的單層貼壁細胞或懸浮細胞均可做融合，但成功概率較大的是單層貼壁細胞。

4、如需HAT選擇系列產(chǎn)品，可選擇LeageneAMediaSupplement(50×)、HTMediaSupplement(50×)、HATMediaSupplement(50×)。

5、請嚴格按照PEG1500溶液(50%,無菌)說明書上的要求進行規(guī)范化操作。

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