PEG1500溶液(50%,無(wú)菌)

【PEG1500溶液(50%,無(wú)菌)】說(shuō)明

【信息說(shuō)明】

產(chǎn)品名稱：PEG1500溶液(50%,無(wú)菌)

供應(yīng)商：遠(yuǎn)慕生化試劑廠家

規(guī)格：10ml 5×10ml

分類：細(xì)胞培養(yǎng)

儲(chǔ)存條件：4℃,6個(gè)月

用途：聚乙二醇可用作融合劑,以獲得生產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞,誘導(dǎo)細(xì)胞雜交，同sigma10783641001。

注意事項(xiàng)：無(wú)菌溶液，由HEPES和PEG1500或稱聚乙烯醇1500組成,經(jīng)過(guò)濾除菌。

【簡(jiǎn)介說(shuō)明】

PEG1500溶液(50%,無(wú)菌)可用作融合劑，以獲得生產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，誘導(dǎo)細(xì)胞雜交，該試劑同sigmaP7181產(chǎn)品，經(jīng)嚴(yán)格無(wú)菌處理，僅用于科研領(lǐng)域，不用于臨床診斷或治療。

聚乙二醇(Polyethyleneglycol,PEG)有眾多品種，常見的有PEG400、PEG1500、PEG4000、PEG6000、PEG8000等，聚乙二醇系列產(chǎn)品無(wú)毒、無(wú)刺激性，味微苦，具有良好的水溶性，并與許多有機(jī)物組份有良好的相溶性，具有優(yōu)良的潤(rùn)滑性、保濕性、分散性、粘接劑、抗靜電劑及柔軟劑等。

分子量200～600者常溫下是液體，分子量在600以上者就逐漸變?yōu)榘牍腆w狀，隨著平均分子量的不同，性質(zhì)也有差異。從無(wú)色無(wú)臭粘稠液體至蠟狀固體。隨著分子量的增大，其吸濕能力相應(yīng)降低。其中PEG4000和PEG6000常用于促進(jìn)細(xì)胞融合或原生質(zhì)體融合并有助于生物體(如酵母菌)在轉(zhuǎn)化中攝入DNA。

【操作步驟】

1、如果變成膠凍狀,可37~60℃水浴使其變成溶液。

2、單層貼壁細(xì)胞:將雜交前體細(xì)胞以相同數(shù)量(5×104/ml)接種,以適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞,待細(xì)胞貼壁擴(kuò)展至匯合成片(80%匯合率)的密度。

3、吸干培養(yǎng)液,加入PEG1500溶液(50%,無(wú)菌),輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)1min使PEG1500溶液覆蓋所有細(xì)胞。

4、靜置1min,加入5ml完全MEM培養(yǎng)液以稀釋PEG1500溶液,棄上清液，用補(bǔ)加1×HT和1×A的完全培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞。

5、融合12~24h后進(jìn)行異核體分析，雜交前體細(xì)胞在4~5天內(nèi)發(fā)生死亡，對(duì)于大多數(shù)融合前體細(xì)胞而言，10~14天可見雜交細(xì)胞克隆。

6、懸浮細(xì)胞：將兩種不同親體的細(xì)胞各1ml(約為1×107)混勻，離心以沉淀雜交前體細(xì)胞，棄上清液，使之剩余約1ml，手指輕彈管底或手搖離心管使兩種細(xì)胞混勻并重新懸浮。

7、1000g離心，棄上清液，加入完全MEM培養(yǎng)液以稀釋PEG1500溶液，吸干凈稀釋的PEG1500溶液；用無(wú)血清MEM培養(yǎng)液，手搖離心管重懸細(xì)胞(不要破壞細(xì)胞)，1000g離心5min，棄上清液，重復(fù)1次該步驟。

8、加入含有20%的胎牛血清的HAT選擇培養(yǎng)液，混勻，將細(xì)胞懸液用培養(yǎng)液稀釋至5×104/ml,接種于96孔板(每孔0.1ml)或其他器皿中，37℃5%CO2孵育過(guò)夜后選出融合細(xì)胞。

【注意事項(xiàng)】

1、應(yīng)注意無(wú)菌操作，避免被微生物污染。

2、PEG1500溶液較為粘稠時(shí)，可37~60℃水浴使其變成溶液。

3、體外培養(yǎng)的單層貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞均可做融合，但成功概率較大的是單層貼壁細(xì)胞。

4、如需HAT選擇系列產(chǎn)品，可選擇LeageneAMediaSupplement(50×)、HTMediaSupplement(50×)、HATMediaSupplement(50×)。

5、請(qǐng)嚴(yán)格按照PEG1500溶液(50%,無(wú)菌)說(shuō)明書上的要求進(jìn)行規(guī)范化操作。

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1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨，一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。

2、部分非常用產(chǎn)品，需提前1-2日預(yù)訂，海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。

3、部分產(chǎn)品價(jià)格會(huì)因貨期、批次等因素發(fā)生變化，若有變動(dòng)以訂貨當(dāng)日價(jià)格為準(zhǔn)。

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