PEG1450溶液(50%,無菌)

【PEG1450溶液(50%,無菌)】操作步驟_注意事項_簡介信息

【信息說明】

產(chǎn)品名稱：PEG1450溶液(50%,無菌)

供應(yīng)商：遠慕生化試劑廠家

規(guī)格：10ml 5×10ml

分類：細胞培養(yǎng)

儲存條件：4℃,6個月

用途：聚乙二醇可用作融合劑，以獲得生產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤細胞，誘導(dǎo)細胞雜交，同SigmaP7181。

注意事項：無菌溶液，由DPBS(pH7.4)和PEG1450或稱聚乙烯醇1450組成,經(jīng)過濾除菌。

【操作步驟】

1、 如果變成膠凍狀,可37~60℃水浴使其變成溶液。

2、單層貼壁細胞:將雜交前體細胞以相同數(shù)量(5×104/ml)接種，以適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基培養(yǎng)細胞,待細胞貼壁擴展至匯合成片(80%匯合率)的密度；吸干培養(yǎng)液，加入 PEG1450溶液(50%,無菌)，輕輕轉(zhuǎn)動1min使PEG1450溶液覆蓋所有細胞。

3、靜置1min：加入完全MEM培養(yǎng)液以稀釋PEG1450溶液，吸干凈稀釋的PEG1450溶液，再用5ml MEM培養(yǎng)液洗滌被PEG處理的細胞；吸干凈洗液，加入 MEM培養(yǎng)液，37℃，5%CO2培養(yǎng)過夜。24~48h后先吸去培養(yǎng)液，加入胰酶消化液處理細胞，待細胞消化后吸除胰酶消化液，用HAT選擇培養(yǎng)剔除HPRT和TK缺陷細胞。

4、棄上清液：用補加1×HT和1×A的完全培養(yǎng)液重新懸浮細胞；融合后進行異核體分析，雜交前體細胞在4~5天內(nèi)發(fā)生死亡，對于大多數(shù)融合前體細胞而言，可見雜交細胞克隆。

5、懸浮細胞：將兩種不同親體的細胞各1ml(約為1×107)混勻，離心以沉淀雜交前體細胞，棄上清液，使之剩余約1ml，手指輕彈管底或手搖離心管使兩種細胞混勻并重新懸浮；在離心管中加入1ml PEG1450溶液(50%,無菌)，置于37℃水浴，加入提前37℃預(yù)熱的含10%胎牛血清的MEM培養(yǎng)液，使PEG1450稀釋并停止作用。

6、離心：棄上清液,加入5ml完全MEM培養(yǎng)液以稀釋PEG1450溶液，吸干凈稀釋的PEG1450溶液；用5ml無血清MEM培養(yǎng)液，手搖離心管重懸細胞(不要破壞細胞)，1000g離心5min，棄上清液,重復(fù)1次該步驟。

7、加入含有胎牛血清的HAT選擇培養(yǎng)基，混勻；將細胞懸液用培養(yǎng)液稀釋至5×104/ml，接種于96孔板，37℃ 5%CO2孵育過夜24~48h后選出融合細胞。

【注意事項】

1、 應(yīng)注意無菌操作，避免被微生物污染。

2、 PEG1450溶液較為粘稠時，可37~60℃水浴使其變成溶液。

3、 體外培養(yǎng)的單層貼壁細胞或懸浮細胞均可做融合，但成功概率較大的是單層貼壁細胞。

4、 如需HAT選擇系列產(chǎn)品，可選擇Leagene A Media Supplement(50×)、HT MediaSupplement(50×)、HAT Media Supplement(50×)。

【簡介說明】

PEG1450溶液(50%,無菌)主要由PEG1450(CAS號25322-68-3)、磷酸鹽等組成，其作用原理使能夠改變各類細胞的膜結(jié)構(gòu)，使兩細胞接觸點處質(zhì)膜的脂類分子發(fā)生疏散和重組，兩細胞接口處在雙分子層質(zhì)膜的相互親和以及彼此的表面張力作用下，細胞發(fā)生融合。
PEG1450溶液(50%,無菌)可用作融合劑，以獲得生產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤細胞，誘導(dǎo)細胞雜交，僅用于科研領(lǐng)域，不用于臨床診斷或治療。

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