pK19mobSacB-T7 polymerase原核載體

產(chǎn)品名稱：pK19mobSacB-T7polymerase原核載體
規(guī)格：0.5-2ug質(zhì)粒干粉
貨號(hào)：YM2637

基本信息：
別名:T7polymerase
原核抗性:卡那霉素Kan
篩選標(biāo)記:自殺基因SacB
克隆菌株:大腸桿菌DH5α
培養(yǎng)條件:LB培養(yǎng)基/37℃

質(zhì)粒圖譜



擴(kuò)增流程：
收到產(chǎn)品后，請(qǐng)先根據(jù)產(chǎn)品管壁標(biāo)簽來判斷產(chǎn)品形式，并在擴(kuò)增前準(zhǔn)確查找該質(zhì)粒的抗性、感受態(tài)和培養(yǎng)溫度。
1、質(zhì)粒干粉（請(qǐng)務(wù)必轉(zhuǎn)化挑單克隆重提后使用）
①收到質(zhì)粒干粉后請(qǐng)先5000rpm離心1min，再加入20μl無菌水溶解質(zhì)粒；
②取2μl質(zhì)粒加至100μl感受態(tài)中，冰浴30min后，42℃熱激60s，不要攪動(dòng)，再冰浴2min；
（從第二步開始均要在超凈工作臺(tái)中無菌操作）
③加入500μl無抗的LB液體培養(yǎng)基，180rpm震蕩培養(yǎng)45min；
④取10μl、100μl復(fù)蘇液，并分別涂布至目標(biāo)質(zhì)?？剐缘腖B平板上；
（可使用本平臺(tái)的平板涂布專用玻璃珠進(jìn)行涂布，可以比傳統(tǒng)涂布方法獲得更多轉(zhuǎn)化子）
⑤將平板正向培養(yǎng)1h，再倒置37度培養(yǎng)16h。如果要求是30度則培養(yǎng)20h；
（如果菌落過多，請(qǐng)將質(zhì)粒稀釋后再轉(zhuǎn)化。如果無菌落，請(qǐng)加入10μl質(zhì)粒離心全涂轉(zhuǎn)化）
⑥挑取單菌落至LB液體培養(yǎng)基中，加入對(duì)應(yīng)抗生素，220rpm震蕩培養(yǎng)14h，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要和質(zhì)粒提取試劑盒說明書提取質(zhì)粒。

2、甘油菌：四區(qū)劃線后挑單菌落培養(yǎng)，酵母菌需要先液體復(fù)蘇再四區(qū)劃線，再挑單菌落液體培養(yǎng)。
3、穿刺菌：穿刺接種，液體培養(yǎng)后四區(qū)劃線，再挑單菌落液體培養(yǎng)。
4、平板：直接挑取單菌落至液體培養(yǎng)基中。
5、液體質(zhì)粒：?jiǎn)为?dú)提取的液體質(zhì)粒收到后可直接使用。