細胞培養(yǎng)實驗室發(fā)生支原體污染的風險較高。支原體天然存在于周圍空氣(氣溶膠形式)、人的體表(攜帶和隱藏)以及未徹底消毒的器物表面,而細胞培養(yǎng)基中由于含有血清,營養(yǎng)豐富,很容易導致支原體的快速繁殖。
支原體的污染肉眼不易察覺,直到嚴重的階段才會出現(xiàn)培養(yǎng)基變色、細胞異常等情況。支原體可造成細胞代謝改變,基因表達譜發(fā)生變化,從而嚴重干擾實驗進程。因此,在細胞培養(yǎng)過程中,定期監(jiān)測是否存在支原體污染,及時預防支原體污染是每個科研人員的工作之一。
為防止支原體污染細胞,可采取以下措施:
1、保持無菌技術:始終在無菌環(huán)境中工作,使用適當?shù)膫€人防護設備,例如手套和實驗室外套,定期對實驗室進行清潔,可以使用支原體祛除試劑:Mycoplasma-off,無需配制,即噴即用;Water Shield可用于水槽、水浴鍋等處的支原體祛除和預防。保持良好的實驗室衛(wèi)生:保持實驗室清潔和維護良好,包括設備和表面。
2、使用無支原體細胞系:建議從信譽良好的供應商提供的無支原體細胞系開始。
3、定期檢測支原體:定期檢測細胞培養(yǎng)物是否存在支原體污染至關重要。可以使用各種測試,包括基于 PCR 的方法、熒光染色和 ELISA。
4、避免交叉污染:保持細胞培養(yǎng)分離,避免交叉污染。正確標記和處理細胞系。
通過采取這些措施,可以降低支原體污染的風險,并保持基于細胞的實驗的完整性和可靠性。