遠(yuǎn)慕生物簡(jiǎn)述幾種TBS緩沖液配制方法

       TBS緩沖液是Tris-HCl緩沖鹽溶液，為等滲鹽溶液加Tris-HCl緩沖液。屬于常規(guī)pH緩沖液，常用于清洗免疫染色的組織或Western?Blot?中的蛋白印跡膜等，是常用分子生物學(xué)試劑。TBS緩沖液(0.05mol/L,pH7.4)主要由Tris、氯化鈉、BSA、防腐劑等組成，可用于免疫金銀染色中清洗組織，亦可作為封閉液的基礎(chǔ)試劑。
Tris緩沖鹽水（TBS）：10mmol/L,Tris含0.9%NaCl,用1N HC1調(diào)pH至7.4；
操作步驟(僅供參考)：
1、石蠟切片脫蠟至水。
2、胰蛋白酶消或3M尿素消化。
3、蒸餾水沖洗2次。
4、TBS緩沖液(0.05mol/L,pH7.4)振蕩洗滌2次，每次5～10min。
5、進(jìn)行封閉及下游其他實(shí)驗(yàn)。
一、TBS的配制
0.05 M TBS ( pH7.4 ) 的配制：
Tris (三羥甲基胺基甲烷 )12.1g
NaCl17.5g
加蒸餾水1500ml
磁性攪拌下滴加濃HCl至pH為7.4，再加蒸餾水至2000ml，即可。
如需含1% Triton X-100，則在滴加HCl前先加入20ml Triton X-100。
二、THB的配制
A液 ( 0.2 M Tris )：( MW 121.14 ) 稱取2.428克 Tris，溶于100毫升蒸餾水中。
B液 ( 0.1 N HCl)： 取37% HCl ( 比重1:19 ) 0.84毫升，加入蒸餾水中，使成100毫升。
不同pH ( 7.19 ~ 9.10 ) 的0.05 M THB配制：按下表，取A液25ml加B液Xml，補(bǔ)加蒸餾水至100ml。
B=X     pH     B=X     pH
45.0   7.19   25.0   8.14
42.5   7.36   22.5   8.23
41.4   7.40   20.0   8.32
40.0   7.54   17.5   8.41
38.4   7.60   15.0   8.51
37.5   7.66   12.5   8.62
35.0   7.77   10.0   8.74
32.5   7.87   7.5    8.92
30.0   7.96   5.0    9.10

27.5   8.05