如何養(yǎng)出一盤飽滿漂亮的細胞

2019-09-23 12:02 來源：上海遠慕生物試劑

臨近開學(xué)，我司技術(shù)支持（兼心理輔導(dǎo)師）經(jīng)常收到這樣焦慮的問題：“ 老si，你好，如何才能收獲一盤漂亮的細胞呢？為啥別人家的細胞養(yǎng)得那么好呢，我的就一言難盡呢”養(yǎng)出漂亮細胞這個事兒本就說來話長~之前講過細胞貼壁、老化、成團、凍存、復(fù)蘇、污染等問題。這次小編又整理了一遍，先看看這些基本點是否都做好了

絕對的無菌意識
1. 細胞剛拿到手最好先做一下支原體檢測，發(fā)現(xiàn)有污染迅速處理掉。
2. 嚴格無菌操作，BI也提供Pharmacidal噴壺，有效預(yù)防真菌（和孢子），細菌（和孢子），支原體和病毒 (包括HIV和Hepatitis B) 的生長和污染。
3. 真的不要和別人共用試劑耗材，自己準備一套！
4. 水浴鍋很臟，可用BI Aquaguard-1 消毒水盤，效果非常好。
5. 最好是同一時間只有一個人在細胞房養(yǎng)細胞。

用好培養(yǎng)基和血清
1. 養(yǎng)細胞之前，就要先了解細胞的來源、種類、名稱，查閱一定量的文獻，確定所需培養(yǎng)基種類及是否需要添加特殊成分。
2. 血清主要功能是補充細胞生長因子，提供細胞生長所需的蛋白質(zhì)、脂肪、糖類、不同細胞對生長因子的要求也不一樣。血清替代物取代血清補充生長因子和蛋白質(zhì)，但不一定是最適合細胞的，因此使用時要注意，避免引起細胞分化或老化。
3. 這里我們順便說一下常見的血清沉淀：血清沉淀是血清纖維的凝集，不影響細胞生長，不必驚慌！我們建議2000rpm離心5min取上清即可，并不影響血清質(zhì)量。
4. 如果細胞活力差，可增加血清濃度到20%，給細胞較多的生長因子，等細胞長起來再降回原來的濃度。

了解細胞生長習性
不同的細胞生長習性不同，了解細胞生長習性，正確計數(shù)，才能掌握好傳代密度。對于一般細胞株，控制在三天一傳，是比較合適的，細胞不會太擠也不會太寂寞。但例如癌細胞，一發(fā)起瘋來半天就可以傳代，不及時換液或擴增分分鐘會餓死或擠死。
所以剛開始接觸一款細胞，要勤觀察，及時掌握它的生長情況。掌握細胞的生長節(jié)奏之后可以變成一天一看或兩天三看，畢竟太頻繁的把它從培養(yǎng)箱里拿出來也不太好。

胰酶消化程度是要害
消化一定程度上是對細胞的一種折磨，在使用胰酶（Trypsins）細胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細菌污染。胰酶細胞消化液消化細胞時間不宜過長，否則細胞鋪板后生長狀況會較差，做流式時的CD Marker 也可能會下降。

對大部分細胞消化來說，可以在消化到差不多快要脫落的時候，移除大部分胰酶，然后直接加新鮮的培養(yǎng)基將細胞吹打下來，省去離心步驟。殘余的胰酶含量很低，所以不會對細胞產(chǎn)生任何影響。
對于難消化的細胞，如HCT15, LS411和KM12，用不含Ca²⁺、Mg²⁺的PBS洗滌一次后，加入稍微多一點胰酶，置37oC徹底消化(一般為幾分鐘)至脫落（一晃細胞就掉下來），然后再加含血清的培養(yǎng)基終止胰酶反應(yīng)、離心 (若是無血清培養(yǎng)基，需改加胰酶抑制劑)。這么做的道理是，細胞消化不徹底，勢必會增加吹打輔助脫落的次數(shù)，而吹打次數(shù)越多，細胞活性越差。

培養(yǎng)瓶的選擇
一般，生長速度慢的細胞如果想要更漂亮的細胞狀態(tài)，那么采用塑料瓶會比玻璃瓶的效果好；生長速度快的細胞，用玻璃瓶培養(yǎng)的效果會更好。因此，對于同一種細胞，在其生長速度慢的時候（比如細胞剛復(fù)蘇時或者原代培養(yǎng)），塑料瓶會好一點；而在其生長旺盛的時候，玻璃瓶則相對會好一點。

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