遠慕生物:細胞培養(yǎng)中支原體污染的解決方案

支原體最早發(fā)現(xiàn)于 1898 年，1956 年 Robinson LB 首次從細胞培養(yǎng)物中分離出支原體。它廣泛存在于自然界中。污染細胞最常見的支原體包括發(fā)酵支原體（M.Fementans）、豬鼻支原體（M.hyorhinis）、口腔支原體（M.orale）、精氨酸支原體（M.arginina）、梨支原體（M.pirum）、唾液支原體（M.salivarium）和人型支原體（M.hominis）。

支原體的特點：

1、支原體是最小、最簡單、能夠自我復(fù)制的原核生物，其大小介于細菌和病毒之間。

2、結(jié)構(gòu)簡單，無細胞壁，形態(tài)多樣，可通過細菌濾器。

3、對一般抗生素不敏感，是細胞培養(yǎng)污染的一種常見微生物。

4、多數(shù)支原體污染比較隱蔽，顯微鏡下觀察，可見單個荷包樣菌落。

5、被支原體污染后的細胞培養(yǎng)物，引起細胞形態(tài)學(xué)和功能的改變，且很難清除。

支原體污染的特征：

    細胞形態(tài)學(xué)的改變

    細胞生長模式的改變

    細胞活力減弱

    轉(zhuǎn)染效力顯著降低

    培養(yǎng)基上可見黑色顆粒

    細胞表面可見黑色孔洞

支原體污染的檢測：

1、電子顯微鏡技術(shù)

電鏡中可看到支原體的多種增殖方式。

該技術(shù)快速、簡便、省事省力，但敏感性不夠高，能作為篩查方法，而對于可疑或陽性的細胞株，需要其他方法檢測鑒定。

2、培養(yǎng)法

支原體在固體培養(yǎng)基上形成特征的「油煎蛋」菌落。

理想的培養(yǎng)法應(yīng)采用多功能的培養(yǎng)基，以降低假陰性率，為增加對低滴度和低活力支原體檢出率，應(yīng)采用有氧和無氧兩種培養(yǎng)條件及幾種傳代方式，或者與生物化學(xué)試驗相結(jié)合檢測支原體。

3、染色法

（1）姬姆薩或地衣紅染色

姬姆薩染色后為淡紫色或藍色，地衣紅染色鏡下觀察可見支原體呈暗紫色小點，位于細胞外或細胞之間。

（2）DNA 熒光染色法

支原體污染的細胞不僅在細胞核而且在細胞核外及細胞膜上均可見散在熒光。

該方法操作較為簡便，但輕度污染不易檢出，且 DNA 熒光染色靈敏度不高、檢測時需要熒光素及熒光顯微鏡，不能檢測到種，一般要求培養(yǎng)無污染的指示細胞作為對照。

4、PCR 檢測法

PCR 檢測方法已經(jīng)成為一種常用的有效檢測微生物的方法，尤其適用于培養(yǎng)困難和抗原性復(fù)雜的細菌檢測鑒定，可快速檢測細胞培養(yǎng)物、生物制品、血清等生物材料中的支原體污染，比常規(guī)培養(yǎng)法和 DNA 間接熒光染色法快 5-10 天。

目前，北京寶威特生物提供性價比極高的專門針對支原體污染的全面解決方案，根據(jù)不同的用戶需求，提供國產(chǎn)和進口兩套支原體檢測產(chǎn)品。

支原體解決方案包括：

1、針對高度保守的支原體 16SrRNA 序列設(shè)計，可檢測的支原體種類非常廣泛，不會受真核細胞或細菌 DNA 干擾。

2、基于普通 PCR 方法的產(chǎn)品：普通版可檢測 49 種支原體，升級版更可廣泛檢測超過 209 種支原體，并配備了三重核查系統(tǒng)，確保結(jié)果準確。

3、新開發(fā)的基于實時熒光 PCR 方法的產(chǎn)品：可檢測 70 種支原體，顯著提高了檢測的敏感性使其檢測限達到 10 CFU/ml，并配備了內(nèi)部質(zhì)控和陽性質(zhì)控以確保實時熒光 PCR 檢測結(jié)果的有效性。

4、經(jīng)本試劑盒測試的支原體菌株包括：肺炎支原體（M.pneumoniae）、精氨酸支原體（M.argnini）、豬鼻支原體（M.hyorhinis）、發(fā)酵支原體（M.fermentans）、口腔支原體（M.orale）和無膽甾支原體（A.laidlawii），涵蓋了所有常見的支原體污染種類。

5、檢測所需的試劑都預(yù)先混合、并分裝至反應(yīng)管，只需加入模板 DNA 即可。

6、通過 8 聯(lián)管檢測體系有效避免交叉污染。

7、配套用于預(yù)防支原體污染的噴霧，以及用于消除支原體污染的抗生素溶液，全面清除支原體的污染。