如何測量RNA濃度、如何檢測RNA的完整性？

一般通過總量，純度與完整性三大項檢測來確認(rèn)RNA質(zhì)量：
1總量：微量分光光度計測260nm吸收值計算。
2純度：微量分光光度計測260nm/230nm吸收值的比值，用于評估有機(jī)溶劑殘留；260nm/280nm吸收值的比值，用于評估蛋白質(zhì)污染比例。
3完整性：以Agilent Bioanalyzer進(jìn)行毛細(xì)管電泳(capillary electrophoresis)，并以軟件的RIN(RNA Integrity Number)分?jǐn)?shù)評估，10為RNA完整性最好，0為最差。

RNA質(zhì)檢參數(shù)中260、280、320、230nm下的吸光度分別代表了核酸、蛋白質(zhì)、鹽濃度和有機(jī)溶劑的值。其中：

A230: 測定其它碳源物質(zhì)，如酚，糖類等。
A260：核酸的吸收峰測，測RNA，DNA，引物等的濃度用的。
A280：蛋白質(zhì)的吸收峰。
一般的，我們只看OD260/OD280(Ratio，R)在1.8~2.1范圍內(nèi)時，我們認(rèn)為 RNA中蛋白的污染是可以容忍的，不過要注意，當(dāng)用 Tris 作為緩沖液檢測吸光度時，R 值可能會大于 2（一般應(yīng)該是<2.2的）。當(dāng)R 1.8時，溶液中蛋白的污染比較明顯，可以根據(jù)自己的需要決定這份RNA 的命運(yùn)。當(dāng)R > 2.2時，說明RNA已經(jīng)水解成單核酸了，而純RNA的OD260/OD280的比值為2.0。

檢測RNA的完整性的方法：

1. 完整的總RNA在進(jìn)行變性凝膠電泳時會產(chǎn)生清晰的28S和18S rRNA條帶（真核樣品）。28S rRNA條帶的強(qiáng)度應(yīng)當(dāng)大致為18S rRNA條帶的兩倍。這種2:1的比率（28S：18S）是判斷RNA完整性的一個很好的指標(biāo)。

2. 使用變性凝膠電泳來評估RNA完整性的一個缺陷是觀察所需的RNA樣品量。通常情況下，需要在變性凝膠中上樣至少200 ng的RNA才能在EtBr染色下進(jìn)行觀察。而在某些RNA制備實驗中，如從穿刺活檢樣品或激光捕獲顯微切割樣品中提取RNA，得率是非常低的。這種情況下，或許就不可能在進(jìn)行表達(dá)譜分析實驗前取出200ng的RNA來評估其完整性。其它的核酸染料，比如Moleculor Probes (Eugene, OR) 的SYBR&#174; Gold及SYBR Green II RNA染料，相比傳統(tǒng)的瓊脂糖凝膠電泳EtBr染色方法可以顯著提高靈敏度。通過使用300nm的透射光源（6 x 15瓦的燈泡）及特殊的濾光片，SYBR Gold RNA凝膠染色可以檢測到低至1ng的RNA，而SYBR Green II則可以檢測到2ng，從而可以使用更少的樣品來進(jìn)行RNA完整性分析。

3. 目前有一種快速簡單的方法可以替代傳統(tǒng)的凝膠分析方法，這種方法可以同時對RNA樣品進(jìn)行定量及質(zhì)量評估。Agilent 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies)是第一款商業(yè)化的提供RNA樣品狀態(tài)細(xì)節(jié)信息的微流體儀器。當(dāng)與RNA 6000 LabChip&#174;（Caliper Technologies Corporation所擁有的一個注冊商標(biāo)）結(jié)合使用時，每次進(jìn)行分析最低僅需1&#181;l濃度為10 ng/&#181;l 的樣品。除了評估RNA完整性，這臺自動化系統(tǒng)同樣可以提供樣品RNA濃度及純度（如mRNA制備中的rRNA污染）的評估。在過去，檢測濃度及純度需要使用部分RNA樣品（通過A260分光光度法），而評估完整性則需要另外使用部分樣品。通過使用LabChip&#174;系統(tǒng)，可以僅使用一份5ng的樣品來同時對濃度、完整性及純度進(jìn)行分析。分析數(shù)據(jù)可以顯示為類凝膠圖像、電泳峰圖及表格形式等。