核糖核酸酶H (RNase H)

RNase H，即Ribonuclease H，中文名為核糖核酸酶H，是一種核糖核酸內(nèi)切酶，可以特異性地水解DNA-RNA雜合鏈中的RNA。RNaseH不能水解單鏈或雙鏈DNA或RNA中的磷酸二酯鍵，即不能消化單鏈或雙鏈DNA或RNA。

特點：特異性消化DNA-RNA雜合鏈中的RNA，常用于cDNA第二鏈的合成。

用途：DNA-RNA雜合鏈中去除RNA，例如cDNA第二條鏈合成前去除mRNA；通過互補(bǔ)的DNA序列實現(xiàn)對RNA的定點剪切；除去雜交到poly(dT)上的mRNA中的poly(A)；體外多腺苷酸化反應(yīng)(polyadenylation reaction)產(chǎn)物研究。

來源：E.coli MRE-600細(xì)胞。

分子量：約18.4kDa(單體)。

活性定義：37℃20分鐘內(nèi)，能夠催化1nmol雜合雙鏈中的RNA形成酸可溶性核糖核苷酸形式所需的酶量定義為1個活性單位。

活性檢測條件：20mM Tris-HCl(pH7.8)，40mM KCl，8mM MgCl2，1mM DTT，24μM[3H]-poly(A).poly(dT)，

0.03mg/ml BSA ，4%(v/v)glycerol。

純度：不含DNA內(nèi)切酶和外切酶，不含其它核糖核酸酶。

酶儲存溶液：25mM HEPES-KOH(pH8.0)，50mM KCl，1mM DTT，1mM EDTA，0.1mg/ml BSA，50%(v/v)glycerol。

Reaction Buffer(10X)：200mM Tris-HCl(pH7.8)，400mM KCl，80mM MgCl2，10mM DTT。

失活或抑制：65℃加熱10分鐘可使RNaseH失活。金屬離子螯合劑和巰基封閉劑均能抑制RNaseH活性。