精子細胞BWW培養(yǎng)基儲存液的滅菌方法,產(chǎn)品用途,特點,說明書,操作步驟,注意事項,規(guī)格等咨訊由上海遠慕生物提供介紹,本司專業(yè)供應(yīng)不同系列的培養(yǎng)基,抗體,動物血清血漿,標準品對照品,抗原,細胞培養(yǎng),蛋白質(zhì),化學(xué)試劑,生化試劑,維生素,氨基酸,生物分子,微生物,實驗耗材,染色液,緩沖液,溶液,其他實驗試劑等,品種齊全,為滿足于客戶的需求,我們的產(chǎn)品推出了進口系列及國產(chǎn)系列,歡迎來電洽談!
中文名:精子細胞BWW培養(yǎng)基儲存液
供應(yīng)商:上海遠慕
規(guī)格:500ml
分類:培養(yǎng)基
保存:4℃,12個月
系列:精子細胞BWW培養(yǎng)基
說明:無菌溶液。經(jīng)過濾除菌處理。
組成:由氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、硫酸鎂、酚紅等組成,不含葡萄糖、丙酮酸鈉、BSA等以及抗生素。
用途:本品是一種旨在用于廣譜動物和人體精子細胞獲能處理的常用營養(yǎng)液。
精子細胞BWW培養(yǎng)基儲存液操作步驟及注意事項:
A、操作步驟:
1、 取干凈的精液樣本室溫放置,使之充分液化。
2、 制備精子細胞(僅供參考,不是必須步驟):
a、上泳法:取一個無菌的15ml錐底離心管,加入1ml液化的精液,在其上方輕輕加入Earle培養(yǎng)液,45°傾斜試管。輕輕豎立試管,取出最上層的1ml液體。加入8ml增補的Earle培養(yǎng)液稀釋,棄上清。加入Earle培養(yǎng)液0.5ml重新懸浮細胞,用于精子密度或功能的評估。
b、非連續(xù)密度梯度法:取一個無菌的錐底離心管,加入Percoll。輕輕加入3ml 40%的Percoll于Percoll液面上,小心操作,不要打亂兩種液體的界面。輕輕加入1-2ml精液于梯度溶液上,棄上清。將管底的精子團重新懸浮于的Earle培養(yǎng)液中,離心,棄上清。加入1mlEarle培養(yǎng)液,重新懸浮。
3、 將含有精子細胞的離心管置于37℃含5%CO2、95%空氣的細胞培養(yǎng)箱中孵育。如無上 述培養(yǎng)箱,可將離心管密封加蓋,置于37℃的普通培養(yǎng)箱內(nèi)孵育。在孵育過程中,大多數(shù)活動的精子從精漿中游離到覆蓋上面的培養(yǎng)液內(nèi)。
4、 離心精子懸液,使精子細胞密度接近于10×106/ml,將精子重懸于精子細胞BWW培 養(yǎng)基中,并在37℃含5%CO2、95%空氣的細胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育。如無上述培養(yǎng)箱,可將離心管密封加蓋,置于37℃的普通培養(yǎng)箱內(nèi)孵育。在孵育過程中,將試管20°傾斜。
B、注意事項:
1、 注意無菌操作,盡量避免污染。
2、 如無Earle培養(yǎng)液和增補的Earle培養(yǎng)液,可用精子細胞BWW培養(yǎng)基代替。
3、 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
4、操作過程中,請遵循說明書操作。
精子細胞BWW培養(yǎng)基儲存液滅菌方法及保存方法:
A、滅菌方法:
1、高壓蒸汽滅菌:
a、高壓蒸汽滅菌適合于耐高溫培養(yǎng)基、接種器械和蒸餾水的滅菌。培養(yǎng)基在愛制備過程中混入各種雜菌,分裝后應(yīng)立即滅菌,至少應(yīng)在24h內(nèi)完成滅菌工作。
b、滅菌時一般是在0.105MPa壓力下,溫度121℃時,滅菌15~30min即可。消毒時間不宜過長,也不能超過規(guī)定的壓力范圍,否則有機物質(zhì)特別是維生素類物質(zhì)就會在高溫下分解,失去營養(yǎng)作用,也會使培養(yǎng)基變質(zhì)、變色,甚至難以凝固。
c、將蒸餾水或自來水裝在三角瓶中,裝水量一般不超過瓶的2/3,用牛皮紙或硫酸紙包扎封口,然后放入高壓鍋中滅菌后即為無菌水。
d、滅菌后的培養(yǎng)基可放到培養(yǎng)室中預(yù)培養(yǎng)3d,若無污染現(xiàn)象,則證明滅菌是徹底的,可以使用。暫時不用的培養(yǎng)基最好置于10℃下保存。
e、含IAA或GA3的培養(yǎng)基應(yīng)在1周內(nèi)用完,其他培養(yǎng)基最多也不要超過1個月。
2、過濾滅菌:
a、一些植物生長調(diào)節(jié)劑及有機物,如IAA、GA3、ZT、CM等,遇熱容易分解,不能與培養(yǎng)基一起進行高溫滅菌,而要使用細菌過濾器濾去其中的雜菌。
b、細菌過濾器與濾膜(孔徑0.45微米)使用之前要先進行高壓滅菌。過濾后的溶液要立即加入培養(yǎng)基中,若為液體培養(yǎng)基,可在培養(yǎng)基冷卻至30℃時加入;若為固體培養(yǎng)基,必須在培養(yǎng)基凝固之前(50-60℃)加入,振蕩使溶液與其他成分混合均勻。
將已經(jīng)滅菌完畢的培養(yǎng)基從高壓滅菌鍋中取出后,立即放在平整的臺面上,若大批量生產(chǎn)可用果箱裝好并標記好其用選后,送到接種室,讓其自然冷卻凝固。滅好的培養(yǎng)基最好經(jīng)過3d的預(yù)培養(yǎng),以便觀察培養(yǎng)基是否徹底滅菌,這樣能夠使某些因為沒有徹底滅菌的培養(yǎng)基,在接種前被檢出,可避免雜菌污染而造成不必要的損失,這點對少而重要的材料尤其值得注意。但是在同等條件下經(jīng)多次使用無污染后,就沒必要再擺3d后才使用,而是冷卻凝固后就可使用了。
?精子細胞BWW培養(yǎng)基儲存液特點:
1、DNA測序法:DNA直接測序為突變檢測的金標準
2、Taqman實時熒光定量PCR法
3、焦磷酸測序法
4、好的線性和重復(fù)性
5、即用型試劑盒材料,例如不含內(nèi)毒素的槍頭、試管等
6、高靈敏度和廣泛的應(yīng)用范圍
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