蛋白酶抑制劑混合物使用方法

蛋白酶抑制劑混合物（100×，哺乳動(dòng)物樣品提取用）

規(guī)格：1ml /5×1ml

儲(chǔ)存條件：-20℃保存，有效期一年。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

蛋白酶抑制劑混合物(哺乳動(dòng)物樣品抽提用, 100×)  (Protease  inhibitor cocktail  for mammalian cell and tissue extracts, 100×) 是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞或組織蛋白提取的蛋白酶抑制劑混合物(100mMAEBSF,  80μM  Aprotinin,5mMBestatin,1.5mME64,2mMLeupeptin and1mMPepstatin A in DMSO)，并提供獨(dú)立包裝的0.5MEDTA。

哺乳動(dòng)物細(xì)胞或組織提取物中含有許多內(nèi)源性的蛋白酶、磷酸酶等，容易導(dǎo)致提取物中的蛋白降解或去修飾，從而影響后續(xù)的蛋白檢測(cè)。因此在提取物中添加適當(dāng)?shù)牡鞍酌?、磷酸酶等抑制劑是防止蛋白降解和去修飾的有效方法?br>
本產(chǎn)品為經(jīng)優(yōu)化和測(cè)試的用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞或組織蛋白提取的蛋白酶抑制劑混合物，包含了廣譜的絲氨酸、半胱氨酸和酸性蛋白酶抑制劑、以及氨基肽酶抑制劑。

本產(chǎn)品使用便捷，通常以1:100的比例分別把蛋白酶抑制劑混合物和0.5MEDTA加入裂解液中，如用于檢測(cè)金屬蛋白酶活性，則不宜添加EDTA。

本產(chǎn)品可以有效抑制哺乳動(dòng)物細(xì)胞或組織提取物中的各種蛋白酶活性，如絲氨酸蛋白酶、氨基肽酶、半胱氨酸蛋白酶、蘇氨酸和天冬氨酸蛋白酶、金屬蛋白酶等。其中AEBSF是一種水溶性的絲氨酸蛋白酶不可逆抑制劑，其抑制常數(shù)與PMSF和DFP的抑制常數(shù)相似，可以有效抑制胰蛋白酶(trypsin)、糜蛋白酶(chymotrypsin)、纖溶酶(plasmin)、激肽釋放酶(kallikrein)和凝血酶(thrombin)等蛋白酶，作為PMSF和DFP的替代物，AEBSF的毒性更低、水溶性和水溶液穩(wěn)定性更好。Aprotinin是絲氨酸蛋白酶的競(jìng)爭(zhēng)性可逆抑制劑；Bestatin是氨基肽酶可逆抑制劑；E64是半胱氨酸蛋白酶不可逆抑制劑；Leupeptin是絲氨酸和半胱氨酸蛋白酶可逆抑制劑；Pepstatin A是天冬氨酸蛋白酶可逆抑制劑；EDTA作為螯合劑是金屬蛋白酶的可逆抑制劑。

一個(gè)包裝的本產(chǎn)品通常足夠用于100ml裂解液的配制。

使用方法：

1.本蛋白酶抑制劑混合物為100×的儲(chǔ)存液，使用時(shí)按照1:100的比例加入到裂解液中(例如，1ml裂解液中加入10μl蛋白酶抑制劑混合物)，混勻后即可使用。根據(jù)需要，0.5M的EDTA也按照1:100的比例加入到裂解液中（如用于檢測(cè)金屬蛋白酶活性，則不宜添加EDTA）。含有蛋白酶抑制劑混合物的裂解液宜現(xiàn)用現(xiàn)配，不宜配制后凍存待后續(xù)使用。

2. 待所需的抑制劑添加完畢混勻后，就可以開始進(jìn)行哺乳動(dòng)物組織的裂解和蛋白提取。提示：蛋白酶抑制劑混合物盡量避免反復(fù)凍融，第一次使用后，可按照每次使用量分裝凍存。family:Arial'>1:100的比例加入到裂解液中。

3. 待所需的抑制劑添加完畢混勻后，就可以開始進(jìn)行常規(guī)細(xì)胞或組織的裂解和蛋白提取。提示：蛋白酶抑制劑混合物盡量避免反復(fù)凍融，第一次使用后，可按照每次使用量分裝凍存。