幾種常用的免疫學(xué)技術(shù)知識(shí)簡(jiǎn)介

免疫學(xué)技術(shù)：是指在免疫學(xué)長(zhǎng)期發(fā)展過(guò)程中形成的一套獨(dú)特的研究手段和計(jì)數(shù)，包括人工免疫防治技術(shù)（疫苗和血清）和免疫檢測(cè)技術(shù)（抗原抗體檢測(cè)和機(jī)體免疫功能檢測(cè)）

免疫學(xué)研究涉及到的重要技術(shù)包括：?jiǎn)慰寺】贵w技術(shù)、T細(xì)胞克隆技術(shù)、轉(zhuǎn)基因及基因編輯技術(shù)、分子雜交技術(shù)、聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)等。

常用的免疫學(xué)技術(shù)：

1．免疫熒光技術(shù)免疫熒光技術(shù)是利用熒光素標(biāo)記的抗體（或抗原）檢測(cè)組織、細(xì)胞或血清中的相應(yīng)抗原（或抗體）的方法.由于熒光抗體具有安全、靈敏的特點(diǎn),因此已廣泛應(yīng)用在免疫熒光檢測(cè)和流式細(xì)胞計(jì)數(shù)領(lǐng)域.根據(jù)熒光素標(biāo)記的方式不同,可分為直標(biāo)熒光抗體和間標(biāo)熒光抗體.間標(biāo)熒光抗體中一抗并不直接連接熒光素,而是先將一抗結(jié)合到蛋白,然后帶有熒光素的二抗再結(jié)合至一抗.通過(guò)二抗的結(jié)合,能將信號(hào)進(jìn)行放大,因此能在一定程度上提高檢測(cè)的靈敏度,但是隨之帶來(lái)的高背景也降低了檢測(cè)的特異性.近年來(lái),隨著熒光素和熒光檢測(cè)技術(shù)的不斷進(jìn)步,熒光檢測(cè)的靈敏度已經(jīng)接近同位素檢測(cè)的水平,直接標(biāo)記的熒光抗體逐漸取代間接標(biāo)記抗體.這些標(biāo)記了熒光素的抗體直接結(jié)合至抗原,大大提高了檢測(cè)的特異性,使檢測(cè)的結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠.熒光檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展,使得免疫熒光技術(shù)在傳染病診斷上有廣泛的用途,如在細(xì)菌、病毒、螺旋體感染的疾病,檢查IgM抗體,做為近期接觸抗原的標(biāo)志.利用單克隆熒光直接標(biāo)記抗體鑒定淋巴細(xì)胞的亞類.通過(guò)流式細(xì)胞儀,針對(duì)細(xì)胞表面不同抗原,可以同時(shí)使用多種不同的熒光抗體,對(duì)同一細(xì)胞進(jìn)行多標(biāo)記染色.

2．放射免疫檢測(cè)放射免疫檢測(cè)技術(shù)是目前靈敏度最高的檢測(cè)技術(shù),利用放射性同素標(biāo)記抗原（或抗體）,與相應(yīng)抗體（或抗原）結(jié)合后,通過(guò)測(cè)定抗原抗體結(jié)合物的放射性檢測(cè)結(jié)果.放射性同位素具有pg級(jí)的靈敏度,且利用反復(fù)曝光的方法可對(duì)痕量物質(zhì)進(jìn)行定量檢測(cè).但放射性同位素對(duì)人體的損傷也限制了該方法的使用.

3．酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）酶聯(lián)免疫檢測(cè)是目前應(yīng)用最廣泛的免疫檢測(cè)方法.該方法是將二抗標(biāo)記上酶,抗原抗體反應(yīng)的特異性與酶催化底物的作用結(jié)合起來(lái),根據(jù)酶作用底物后的顯色顏色變化來(lái)判斷試驗(yàn)結(jié)果,其敏感度可達(dá)ng水平.常見(jiàn)用于標(biāo)記的酶有辣根過(guò)氧化物酶(HRP)、堿性磷酸酶（AP）等.由于酶聯(lián)免疫法無(wú)需特殊的儀器,檢測(cè)簡(jiǎn)單,因此被廣泛應(yīng)用于疾病檢測(cè).常用的方法有間接法、夾心法以及BAS－ELISA.間接法是先將待測(cè)的蛋白抱被在孔板內(nèi),然后依次加入一抗、標(biāo)記了酶的二抗和底物顯色,通過(guò)儀器（例如酶標(biāo)儀）定量檢測(cè)抗原.這種方法操作簡(jiǎn)單但由于高背景而特異性較差.目前已逐漸被夾心法取代.夾心法利用二種一抗對(duì)目標(biāo)抗原進(jìn)行捕獲和固定,在確保靈敏度的同時(shí)大大提高了反應(yīng)的特異性.近年來(lái),抗原的定量檢測(cè)技術(shù)也不斷推陳出新.近年來(lái),在夾心法ELISA的基礎(chǔ)上,開(kāi)發(fā)了多抗原檢測(cè)試劑盒,能同時(shí)檢測(cè)微量液相樣本中多個(gè)抗原含量.這項(xiàng)技術(shù)的應(yīng)用大大縮短了診斷的時(shí)間,提高診斷的可靠性和及時(shí)性.

4．免疫金膠體技術(shù)膠體金技術(shù)經(jīng)過(guò)30多年的發(fā)展到現(xiàn)在已日趨成熟,該方法是將二抗標(biāo)記上膠體金顆粒,利用抗原抗體間的特異性反應(yīng),最終將膠體金標(biāo)記的二抗吸附于滲濾膜上,此方法簡(jiǎn)單,快速,廣泛應(yīng)用于臨床篩查.