實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基pH值監(jiān)控的注意事項(xiàng)

pH值是培養(yǎng)基的常規(guī)監(jiān)控項(xiàng)目，微生物的生長不僅依賴豐富的營養(yǎng)，還需要在適宜的pH值范圍內(nèi)才能正常生長繁殖或體現(xiàn)其生物特性，因此培養(yǎng)基pH值是否符合要求直接影響微生物檢驗(yàn)結(jié)果。 1、培養(yǎng)基配置：
配料—溶解—調(diào)PH—過濾—分裝—包扎—滅菌—擺斜面—貯存

1.配料
配方換算→在容器中加入少量水（蒸餾水，自然水）→按照配方稱取各種藥品（依次加入）→加足所需水量（一藥一勺，取藥后立即蓋上瓶蓋）。

2.溶解
淀粉溶解：少量冷水調(diào)成糊狀
加熱溶解，特別是加有瓊脂的培養(yǎng)基，一定要煮沸，瓊脂的熔解溫度95-97℃，且需要邊加熱邊攪拌以防止燒焦。

3.調(diào)PH
用1N的鹽酸或1N的 NaOH把培養(yǎng)基調(diào)節(jié)到所要求的值。

4.過濾
濾紙或棉花進(jìn)行過濾。（有時(shí)可以省去）

5.分裝
一般培養(yǎng)基放在三角瓶或試管中滅菌使用。
(1)三角瓶
若作靜置培養(yǎng)，則100mL培養(yǎng)基/250mL的三角瓶，最多不能超過150mL培養(yǎng)基/250mL的
三角瓶，否則滅菌時(shí)培養(yǎng)基沸騰容易污染棉塞，造成染菌；若作搖瓶培養(yǎng)，則15-20mL培養(yǎng)基/250mL的三角瓶，保證通氣良好。
(2)試管分裝
液體培養(yǎng)基一般裝4-5mL，約試管的1/4高度；
固體斜面培養(yǎng)基一般裝3-4mL，約試管的1/5高度。

6.包扎
分裝好后，塞上棉塞，在用牛皮紙將棉塞包裹好，防止滅菌時(shí)水份進(jìn)入把棉塞弄濕。

7.滅菌
按配方上要求的溫度、壓力進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高，營養(yǎng)成分會(huì)被破壞，培養(yǎng)基中的糖、氨基酸會(huì)使培養(yǎng)基的顏色變深。

8.擺斜面
滅菌后需要擺斜面的試管要趁熱斜著擺放，使其凝固成為一個(gè)斜面，約占試管長度的1/2。

9.貯存
培養(yǎng)基在30℃下放置一天，無污染的即可使用。一般用牛皮紙包裹好存放于2-8℃冰箱中備用

注意事項(xiàng)：
在配制時(shí)，首先要確保培養(yǎng)基未結(jié)塊、顏色未發(fā)生變化或其他物理性狀明顯改變；應(yīng)按照使用說明上的要求操作，稱量應(yīng)達(dá)到相應(yīng)的精確度；純化水是配制培養(yǎng)基最常用的溶劑，應(yīng)確保溶劑的質(zhì)量符合要求；配制培養(yǎng)基應(yīng)采用干凈且不會(huì)對(duì)培養(yǎng)基理化特性產(chǎn)生改變的容器。
在分裝前，應(yīng)確保培養(yǎng)基完全溶解混勻，加熱助溶是最常用的方法，應(yīng)注意不要過度加熱，尤其是含糖量較高的培養(yǎng)基，糖類不耐熱的特性會(huì)使糖類在高溫條件下產(chǎn)生有機(jī)酸而使pH值下降。

2、培養(yǎng)基的pH控制
培養(yǎng)基的pH必須控制在一定的范圍內(nèi)，以滿足不同類型微生物的生長繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物。
雖然培養(yǎng)基中含有緩沖物質(zhì)成分，能使培養(yǎng)基的pH盡可能的保持在要求的范圍內(nèi)，但是配出的培養(yǎng)基若不符合要求，就要進(jìn)行必要的調(diào)整。如果有已校準(zhǔn)pH計(jì)，可用pH計(jì)，如果沒有，可用精密的pH試紙，再根據(jù)需要用1 moL/L氫氧化鈉或1moL/L鹽酸（微調(diào)可用0.1氫氧化鈉或0.1moL/L鹽酸）調(diào)制所需的pH。培基的pH一般為7.4～7.6，也有酸性或堿性的。用氫氧化鈉調(diào)整的需要高壓滅菌的培養(yǎng)基，在調(diào)整pH時(shí)要調(diào)至高出所需0.1個(gè)～0.2個(gè)單位，因用氫氧化鈉調(diào)整時(shí)，高壓滅菌后，培養(yǎng)基的pH要降低0.1~0.2。如培養(yǎng)基中含有碳酸鈣成分，可不pH。

3、pH電極的維護(hù)保養(yǎng)
目前，實(shí)驗(yàn)室使用pH計(jì)電極大部分都是復(fù)合電極。其優(yōu)點(diǎn)是使用方便，不受氧化-還原物質(zhì)的影響，且平衡速度快。使用時(shí)應(yīng)注意以下事項(xiàng)：
⒈復(fù)合電極不用時(shí)，可充分浸泡飽和氯化鉀溶液中。切忌用洗滌液或其他吸水性試劑浸洗。
⒉使用前，檢查玻璃電極前端的球泡。正常情況下，電極應(yīng)該透明而無裂紋；球泡內(nèi)要充滿溶液，不能有氣泡存在。
⒊測(cè)量濃度較大的溶液時(shí)，盡量縮短測(cè)量時(shí)間，用后仔細(xì)清洗，防止被測(cè)液粘附在電極上而污染電極。
⒋清洗電極后，不要用濾紙擦拭玻璃膜，而應(yīng)用濾紙吸干, 避免損壞玻璃薄膜、防止交叉污染，影響測(cè)量精度。
⒌測(cè)量中注意電極的銀—氯化銀內(nèi)參比電極應(yīng)浸入到球泡內(nèi)氯化物緩沖溶液中，避免電計(jì)顯示部分出現(xiàn)數(shù)字亂跳現(xiàn)象。使用時(shí)，注意將電極輕輕甩幾下。
⒍電極不能用于強(qiáng)酸、強(qiáng)堿或其他腐蝕性溶液。
⒎嚴(yán)禁在脫水性介質(zhì)如無水乙醇、重鉻酸鉀等中使用