過氧化物酶(POX)染色實(shí)驗(yàn)方法

實(shí)驗(yàn)原理

血細(xì)胞中的過氧化物酶(Peroxidase,POX或MPO)能分解試劑中的底物H2O2，釋出新生態(tài)氧，使無色聯(lián)苯胺氧化為藍(lán)色聯(lián)苯胺，后者與亞硝基鐵氰化鈉結(jié)合形成藍(lán)黑色的顆粒，沉著于細(xì)胞質(zhì)中。

實(shí)驗(yàn)方法

材料：

1.1%TMB

2.亞硝基鐵氰化鈉飽和溶液

3.1%過氧化氫溶液

4.稀過氧化氫溶液

5.瑞氏染色液

6.新鮮涂片(骨髓或者血片)、染色架、顯微鏡等

方法：

1.取0.1%TMB乙醇溶液lml，加亞硝基鐵氰化鈉飽和溶液10?l，溶液呈淡棕黃色。

2.在新鮮干燥的血片上，加混合溶液0.5ml，放置lmin后，再加稀過氧化氫溶液0.7ml，染色6min。

3.自來水沖洗，待干，瑞氏染液復(fù)染15～20min。

4.自來水沖洗，待干，油鏡鏡檢。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算

細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有藍(lán)黑色顆粒者為陽性。

（－）無顆粒沉著；

（±）顆粒細(xì)小，分布稀疏；

（+）顆粒較粗，局灶分布；

（++）顆粒粗大，分布較密，占胞質(zhì)1/2~2/3；

（+++）顆粒粗大，呈團(tuán)塊分布，幾乎布滿胞質(zhì)；

（++++）全部胞質(zhì)均布滿顆粒，可覆蓋胞核。

注意事項(xiàng)

1.血涂片和骨髓片應(yīng)該新鮮制作，涂片應(yīng)該厚薄適宜；

2.TMB配置在85%~88%的乙醇溶液中效果較好，勿用90%~95%乙醇，否則細(xì)胞表面蛋白質(zhì)很快凝固，妨礙試劑向胞內(nèi)滲入而導(dǎo)致染色效果差；

3.H2O2需新鮮配置，其濃度與加入量不能隨意更改。涂片中粒細(xì)胞看不見顆粒，紅細(xì)胞呈棕色或者綠色，即表示H2O2過濃。若H2O2加于玻片上無氣泡，則表示無效；

4.染色液pH為5.5；

5.試劑應(yīng)置于低溫暗處，防止應(yīng)光線照射而失效。