細(xì)胞培養(yǎng)液中幾種蛋白的提取方法介紹

蛋白質(zhì)濃縮技術(shù)是免疫學(xué)中常用的手段,現(xiàn)遠(yuǎn)慕為科研小伙伴們介紹幾種常用的濃縮技術(shù)

1、透析袋濃縮法

利用透析袋濃縮蛋白質(zhì)溶液是應(yīng)用最廣的一種.將要濃縮的蛋白溶液放入透析袋（無透析袋可用玻璃紙代替）,結(jié)扎,把高分子（6 000－12 000）聚合物如聚乙二醇（碳蠟）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可.也可將吸水劑配成30％－40％濃度的溶液,將裝有蛋白液的透析袋放入即可.吸水劑用過后,可放入溫箱中烘干或自然干燥后,仍可再用.

2、冷凍干燥濃縮法

這是濃縮蛋白質(zhì)的一種較好的辦法,它既使蛋白質(zhì)不易變性,又保持蛋白質(zhì)中固有的成分.它是在冰凍狀態(tài)下直接升華去除水分.具體做法是將蛋白液在低溫下冰凍,然后移置干燥器內(nèi)（干燥器內(nèi)裝有干燥劑,如NaOH、CaCl2和硅膠等）.密閉,迅速抽空,并維持在抽空狀態(tài).數(shù)小時(shí)后即可獲得含有蛋白的干燥粉末.干燥后的蛋白質(zhì)保存方便,應(yīng)用時(shí)可配成任意濃度使用.也可采用凍干機(jī)進(jìn)行冷凍干燥.

3、吹干濃縮法

將蛋白溶液裝入透析袋內(nèi),放在電風(fēng)扇下吹.此法簡(jiǎn)單,但速度慢,且溫度不能過高,最好不要超過15 ℃.

4、超濾膜濃縮法

此法是利用微孔纖維素膜通過高壓將水分濾出,而蛋白質(zhì)存留于膜上達(dá)到濃縮目的.有兩種方法進(jìn)行濃縮：一種是用醋酸纖維素膜裝入高壓過濾器內(nèi),在不斷攪拌之下過濾；另一種是將蛋白液裝入透析袋內(nèi)置于真空干燥器的通風(fēng)口上,負(fù)壓抽氣,而使袋內(nèi)液體滲出.

5、凝膠濃縮法

選用孔徑較小的凝膠,如SephadexG25或G50,將凝膠直接加入蛋白溶液中.根據(jù)干膠的吸水量和蛋白液需濃縮的倍數(shù)而稱取所需的干膠量.放入冰箱內(nèi),凝膠粒子吸水后,通過離心除去.

6、濃縮膠濃縮法

濃縮膠是一種高分子網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的有機(jī)聚合物,具有很強(qiáng)的吸水性能.每克干膠可吸水120 ml-150 ml.它能吸收低分子量的物質(zhì),如水、葡萄糖、蔗糖、無機(jī)鹽等,適宜濃縮10000分子量以上的生物大分子物質(zhì).濃縮后,蛋白質(zhì)的回收率可達(dá)80％～90％.比濃縮膠應(yīng)用方便,直接加入被濃縮的溶液中即可.必須注意,濃縮溶液的pH值應(yīng)大于被濃縮物質(zhì)的等電點(diǎn),否則在濃縮膠表面產(chǎn)生陽離子交換,影響濃縮物質(zhì)的回收率.