高氏1號培養(yǎng)基制備的操作步驟

高氏1號培養(yǎng)基制備的操作步驟

1、稱量和溶化 按配方先稱取可溶性淀粉，放入小燒杯中，并用少量冷水將淀粉調(diào)成糊狀，再加入少于所需水量的沸水中，繼續(xù)加熱，使可溶性淀粉完全溶化。然后再稱取其他各成分，并依次溶化，對微量成分FeSO4 ．7 H2 O可先配成高濃度的貯備 液，按比例換算后再加入。待所有試劑完全溶解后，補充水分到所需的總體積。 配制固體培養(yǎng)基時，將稱好的瓊脂放入已溶的試劑中，在加熱融化，最后補充所損失的水分。

2、調(diào)pH 用試紙測培養(yǎng)基的原始PH,如果偏酸，用滴管向培養(yǎng)基中加入1mol/LNaOH,邊滴邊攪拌，并隨時用pH試紙測其pH,直至pH達7.6。反之，用1mol/LHCI進行調(diào)節(jié)。

3、分裝和加塞 將配制的培養(yǎng)基分裝入試管內(nèi)，在試管口或錐形瓶口上塞上棉塞。

4、包扎 加塞后，將全部試管用麻繩捆好，再在棉塞外包一層牛皮紙，其外再用一根麻繩扎好。用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、配制日期。

5、 滅菌 將上述培養(yǎng)基以1210C,20min,0.103MPa高壓蒸汽滅菌。

6、擱置斜面 將滅菌的試管培養(yǎng)基冷卻至500C左右，將試管口端擱在玻璃棒上。斜面的斜度要適當(dāng)，使斜面的長度約為管長 1/3。

7、無菌檢查 將滅菌培養(yǎng)基放入37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24～28h，以檢查滅菌是否徹底。和改良的差別就在于有沒有FeSO4· 7H2O 高氏常常配完后變成褐色也是由于Fe2+氧化為Fe3+的關(guān)系，所以常常有人用螯合的FeSO4，防止氧化。