氧合血紅蛋白簡介與測定方法

血紅素鐵原子為二價與O2、卟啉的4個N，與珠蛋白的組氨酸殘基（咪唑）結(jié)合，成為八面體的絡(luò)合物結(jié)構(gòu)。它與游離的血紅蛋白不同，是低自旋（spin）物質(zhì)，吸收光譜也類似細(xì)胞色素還原型。氧分壓和氧合血紅蛋白的生成百分率（%）的圖即結(jié)合曲線（解離曲線），由于血紅素間的相互作用的變構(gòu)（alloste－ric）效應(yīng)而呈S型。氧合血紅蛋白的酸性比血紅蛋白強(qiáng)，生成時放出H+，將此稱為庫效應(yīng)。可以認(rèn)為，它在肺中與氧結(jié)合并放出二氧化碳；在組織中在乳酸的生成與氧的游離的相互關(guān)系具有意義。 血紅蛋白測定

（一）檢測原理血液中血紅蛋白以各種形式存在，包括：氧合血紅蛋白、碳氧血紅蛋白、高鐵血紅蛋白（Hi）或其他衍生物。采用比色法測定，包括：氰化高鐵血紅蛋白（HiCN）測定法、十二烷基硫酸鈉血紅蛋白（SDS）測定法、疊氮高鐵血紅蛋白（HiN3）法、堿羥血紅蛋白法、溴代十六烷基三甲胺（CTAB）血紅蛋白測定法等。

1.HiCN測定法原理：血液中除硫化血紅蛋白（SHb）外的各種Hb均可被高鐵氰化鉀氧化為高鐵血紅蛋白，再和CN一結(jié)合生成穩(wěn)定的棕紅色復(fù)合物-氰化高鐵血紅蛋白，其在540nm處有一吸收峰，用分光光度計(jì)測定該處的吸光度，經(jīng)換算即可得到每升血液中的血紅蛋白濃度，或通過制備的標(biāo)準(zhǔn)曲線查得血紅蛋白濃度。

2.SDS測定法原理:血液中除SHb外的各種Hb均可與低濃度SDS作用，生成SDS-Hb棕紅色化合物，其吸收曲線波峰在538nm，波谷在500nm，肩峰在560nm，用分光光度計(jì)測定波峰處吸光度，經(jīng)換算可得到每升血液中的血紅蛋白濃度。

（二）方法學(xué)評價

1.HiCN法:1966年被ICSH推薦為參考方法。該法具有操作簡單、顯色快、結(jié)果穩(wěn)定可靠、讀取吸光度后可直接定值等優(yōu)點(diǎn)。其致命的弱點(diǎn)是氰化鉀（KCN）試劑有劇毒，使用管理不當(dāng)可造成公害。

2.SDS測定法：該法具有操作簡單、呈色穩(wěn)定、準(zhǔn)確性和精確性符合要求、無公害等優(yōu)點(diǎn)。但由于摩爾消光系數(shù)尚未最后確認(rèn)，不能直接用吸光度計(jì)算Hb濃度，而且SDS試劑的質(zhì)量差異較大會影響檢測結(jié)果。

3.HiN3測定法：該法優(yōu)點(diǎn)與HiCN測定法相似，最大吸收峰在542nm，顯色快，結(jié)果穩(wěn)定，試劑毒性僅為HiCN測定法的1／7，但仍存在公害問題。

4.堿羥血紅蛋白（AHD575）測定法：該法試劑簡單，呈色穩(wěn)定，無公害，吸收峰在575nm，可用氯化血紅素作為標(biāo)準(zhǔn)品。但儀器多采用540nm左右濾光板，限制了此法使用。

5.CTAB血紅蛋白測定法該法試劑溶血性強(qiáng)又不破壞白細(xì)胞，適用于儀器上自動檢測Hb和白細(xì)胞。缺點(diǎn)是測定結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度不佳。

6.多參數(shù)血細(xì)胞分析儀:優(yōu)點(diǎn)是操作簡單、快速，同時可獲得多項(xiàng)紅細(xì)胞參數(shù)，血紅蛋白測定原理與手工法相似，儀器法測定精度（CV）約為l%。

（三）質(zhì)量控制

1.樣本異常血漿蛋白質(zhì)、高脂血癥、白細(xì)胞數(shù)超過30×109/L、脂滴等可產(chǎn)生濁度，干擾Hb測定。

2.采血部位：部位不同，結(jié)果不同，靜脈血比毛細(xì)血管血低10%～15%。

3.結(jié)果分析：測定值假性增高的原因是稀釋倍數(shù)不準(zhǔn)、紅細(xì)胞溶解不當(dāng)、血漿中脂質(zhì)或蛋白質(zhì)量增加。

4.HiCN參考液：是制備標(biāo)準(zhǔn)曲線、計(jì)算K值、校準(zhǔn)儀器和其他測定方法的重要物質(zhì)。