遠(yuǎn)慕簡述蛋白凍干技術(shù)和凍干后的影響
2023-03-03 11:34 來源:上海遠(yuǎn)慕生物試劑
第一:什么是蛋白?
蛋白又名雞子白,異名雞卵白(《別錄》)、雞子清(《食療本草》)。為雉科動物家雞的蛋白,是常見的食品。營養(yǎng)優(yōu)良、潤肺利咽、清熱解毒。
第二:蛋白為什么要凍干?
蛋白質(zhì)對熱敏感,凍干能使絕大部分蛋白質(zhì)的活性保留下來,提高蛋白的穩(wěn)定性并延長保存時間,同時降低運費。
第三:凍干對蛋白會有哪些影響?
凍干有可能會造成蛋白的活性部分損失,聚集和其它變性問題。但可以通過添加保護劑(穩(wěn)定劑,添加劑,輔料)和控制凍干的各種條件來盡可能降低這些負(fù)面的影響。
第四:凍干對蛋白前為什么向蛋白溶液中加保護劑?
保護劑是用來在凍干和儲存過程中保護蛋白的。
第五:一般凍干保護劑有哪幾種?
常用的保護劑或穩(wěn)定劑有糖類,多元醇,聚合物,表面活性劑,某些蛋白和氨基酸等。
遠(yuǎn)慕生物常用的保護劑:通常加8%(質(zhì)量比體積)的海藻糖和甘露醇作為凍干保護劑。
海藻糖可明顯阻止蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)改變以及凍干過程中蛋白質(zhì)的伸展和聚集。
甘露醇也是一種普遍應(yīng)用的凍干保護劑和填充劑。有文獻報道甘露醇可以降低某些蛋白的凍干后聚集情況。
第六:怎樣復(fù)溶蛋白干粉?怎樣復(fù)溶蛋白干粉?
建議使用過濾后的無菌純化水作為復(fù)溶劑。添加純化水至推薦的體積,輕輕搖晃西林瓶,使蛋白溶解完全均勻。
注意事項:切忌劇烈搖晃。輕輕搖晃西林瓶,使蛋白溶解完全均勻。
PBS或者其它緩沖液也可以用來做復(fù)溶劑,因為PBS中的鹽可以在體積微量的情況下忽略不計。如果可能,可以做一下兩種復(fù)溶劑的效果比較。
第七:為什么有的蛋白帶標(biāo)簽?
使用蛋白標(biāo)簽的最初目的用于蛋白純化。此外,在某些試驗中可以用于檢測蛋白。Fc標(biāo)簽有穩(wěn)定融合蛋白的作用。 Fc可以自主的形成二聚體,因此他可以幫助融合蛋白,特別是受體,形成有活性的二聚的形式。
第八:標(biāo)簽會影響蛋白活性嗎?
具體情況具體分析。對于某些應(yīng)用,小的標(biāo)簽,如組氨酸標(biāo)簽,可能對蛋白活性的影響比較小,因此也無需將其去除。如果擔(dān)心標(biāo)簽是不是會對蛋白活性有影響,可以咨詢客服進行查詢。另外,有些蛋白標(biāo)簽是可以通過酶切去除的。