慢病毒包裝的作用和關(guān)鍵點(diǎn)說明

慢病毒是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種，它能夠?qū)谢驅(qū)氲揭恍┹^難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，如原代細(xì)胞等，并且將靶基因隨機(jī)整合到宿主的基因組中，從而大大增加了轉(zhuǎn)染效率，并且能夠在細(xì)胞系中穩(wěn)定表達(dá)若干代，可以進(jìn)行穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的篩選。因?yàn)槭请S機(jī)整合，也有不確定因素，有些公司還能提供定點(diǎn)整合技術(shù)，將靶基因定點(diǎn)整合到基因組特定的部位，從而保證其高效表達(dá)并且對(duì)細(xì)胞不產(chǎn)生隨機(jī)整合可能產(chǎn)生的傷害。 慢病毒包裝質(zhì)?？商峁┧械霓D(zhuǎn)錄并包裝shRNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒，需要利用表達(dá)載體和包裝質(zhì)粒同時(shí)共轉(zhuǎn)染細(xì)胞，在細(xì)胞中進(jìn)行病毒的包裝，包裝好的假病毒顆粒分泌到細(xì)胞外的培養(yǎng)基中，離心取得上清液后，可以直接用于宿主細(xì)胞的感染，目的基因進(jìn)入到宿主細(xì)胞之后，經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄，整合到基因組，從而高水平的表達(dá)效應(yīng)分子。

慢病毒包裝的幾個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)：

其關(guān)鍵點(diǎn)是細(xì)胞因素、載體系統(tǒng)（盡量使用成熟的商業(yè)化載體系統(tǒng)）、構(gòu)建重組的質(zhì)粒正確與否、質(zhì)粒抽提純化情況、包裝轉(zhuǎn)染控制（24、48小時(shí)的細(xì)胞及熒光狀態(tài)判斷）、目的基因?qū)Σ《景b影響(基因大小、序列情況、蛋白功能毒性等都會(huì)影響到是否能包裝成功）。

純化后的慢病毒保存方法：慢病毒純化后的病毒用無血清的DMEM保存就可以了，一般放在-80度進(jìn)行長久保存。如果收集的上清不想立即純化可先放在-80度，等下次收集的一起純化。目的蛋白在包裝細(xì)胞中或者滴度測(cè)定細(xì)胞中會(huì)表達(dá)的，滴度測(cè)定就是根據(jù)目的蛋白表達(dá)情況來進(jìn)行操作的。