使用緩沖液注意這些問題
1) 緩沖液使用前必須過濾。
2) 溶劑、樣品易受到細(xì)菌和霉菌的影響,要注意清潔。
3)一般不能直接用有機(jī)溶劑做清洗沖洗。
4)梯度洗脫時,選低吸收值的緩沖液 :
例如:梯度洗脫時,緩沖液與有機(jī)相應(yīng)預(yù)混,以防止析鹽。在保證峰不拖尾的情況下,盡可能選用低濃度的緩沖鹽,防止析鹽; 緩沖鹽濃度,一般用20~30mM基本上就可以了,如果流動相中有機(jī)相含量高的話,流動相中的鹽類緩沖液濃度就不能過高,鹽的濃度起碼要保證在流動相條件下不會析出。離子對緩沖液濃度要高一點,一般50~100mM。
緩沖液大量稀釋后pH變化在什么范圍內(nèi)?
緩沖液大量稀釋后pH只是比原來的溶液有很少的變化。因為稀釋之后,會促進(jìn)緩沖溶液加速水解,其ph值會因此得到補(bǔ)償,而不會發(fā)生劇烈的變化。
由弱酸及其鹽、弱堿及其鹽組成的混合溶液,能在一定程度上抵消、減輕外加強(qiáng)酸或強(qiáng)堿對溶液酸堿度的影響,從而保持溶液的pH值相對穩(wěn)定。這種溶液稱為緩沖溶液。緩沖體系由:
1、弱酸和它的鹽(如HAc---NaAc)
2、弱堿和它的鹽(NH3·H2O---NH4Cl)
3、多元弱酸的酸式鹽及其對應(yīng)的次級鹽(如NaH2PO4---Na2HPO4)的水溶液組成。