微生物在常見選擇性培養(yǎng)基上的菌落特征

微生物培養(yǎng)，在選擇性分離培養(yǎng)基、顯色培養(yǎng)基上的菌落特征，皆由微生物生長繁殖及代謝產(chǎn)物決定，培養(yǎng)基所含營養(yǎng)物質(zhì)，皆為了滿足微生物生長和代謝所需。 培養(yǎng)基簡介：

培養(yǎng)基是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料，一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機鹽（包括微量元素）以及維生素和水等。有的培養(yǎng)基還含有抗菌素和色素，用于各種微生物培養(yǎng)和鑒定。

一般基礎(chǔ)培養(yǎng)基中含有蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸膏、氯化鈉、瓊脂等基本營養(yǎng)萬分。

一些選擇、鑒定培養(yǎng)基根據(jù)用途不同，則需加入抑菌劑、指示劑、血液、糖等試劑，以利于需要菌的生長與鑒別。

一些需要使細菌大量生長、繁殖的培養(yǎng)基，主要成分多為氨基酸、核苷酸、無機鹽、生長因子等。

瓊脂是由石花菜或江籬(屬紅藻)中提取的一種藻膠，是由瓊脂糖和瓊膠質(zhì)組成的長鏈多糖化合物。優(yōu)點在于不能被細菌分解利用，在細菌培養(yǎng)的溫度下凝膠強度穩(wěn)定。

蛋白胨為動物蛋白經(jīng)酶消化后產(chǎn)物，能為微生物提供C源、N源、生長因子等營養(yǎng)物質(zhì)。

胰酪蛋白胨是一種優(yōu)質(zhì)蛋白胨，亦稱胰酶消化酪蛋白胨或胰蛋白胨。系采用酪蛋白經(jīng)胰酶消化后，濃縮干燥而成?？膳渲聘鞣N微生物培養(yǎng)基，用于細菌的培養(yǎng)、分離、增殖、鑒定，以及無菌試驗培養(yǎng)基、厭氧菌培養(yǎng)基等細菌生化特性試驗用培養(yǎng)基的配置。

牛肉浸膏是新鮮牛肉經(jīng)剔除脂肪，消化過濾濃縮得到的一種營養(yǎng)物質(zhì)，含有肌酸、肌酸酐、多肽類、氨基酸、核苷酸、有機酸、礦物質(zhì)及維生素的水溶性物質(zhì)。主要作用是為了補充蛋白胨以及其他氮源的營養(yǎng)不足。

酵母粉富含B族維生素、有機氮以及碳水化合物等營養(yǎng)物質(zhì)。

膽鹽是膽酸鈉鹽，是從動物的膽汁中提取的一種混合物，含膽酸、結(jié)合膽酸以及膽汁醇等，膽鹽用在培養(yǎng)基中是作為選擇性抑制劑，主要抑制革蘭氏陽性菌的生長。

培養(yǎng)基分類：

按營養(yǎng)物質(zhì)可分為：

1、天然培養(yǎng)基：指一類利用動、植物或微生物體包括其提取物制成的培養(yǎng)基。如牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、麥芽汁培養(yǎng)基等。

2、組合培養(yǎng)基：又稱為合成培養(yǎng)基或綜合培養(yǎng)基，是一類按微生物的營養(yǎng)要求精確設(shè)計后用多種高純化學(xué)試劑配制成的培養(yǎng)基。如葡萄糖銨鹽培養(yǎng)基、淀粉硝酸鹽培養(yǎng)基等。

3、半組合培養(yǎng)基：一類主要以化學(xué)試劑配制，同時還加有某種或某些天然成分的培養(yǎng)基。例如，馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基。

按物理性狀分：

1、液體培養(yǎng)基：一類呈液態(tài)的培養(yǎng)基。

2、固體培養(yǎng)基：一類外觀呈固態(tài)的培養(yǎng)基。根據(jù)性質(zhì)又分為。固化培養(yǎng)基、非可逆性固化培養(yǎng)基、天然固態(tài)培養(yǎng)基、濾膜。

3、半固體培養(yǎng)基：指在液體培養(yǎng)基中加入少量的凝固劑而配制成的半固體狀態(tài)的培養(yǎng)基。

4、脫水培養(yǎng)基：又稱預(yù)制干燥培養(yǎng)基，指含有除水分外的一切成分的商品培養(yǎng)基。

按功能性分為：

1、選擇性培養(yǎng)基：一類根據(jù)某微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計的培養(yǎng)基，具有使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌的功能，廣泛用于菌種篩選等領(lǐng)域。

2、鑒別培養(yǎng)基：一類在成分中加有能與目的菌的無色代謝產(chǎn)物發(fā)生顯色反應(yīng)的指示劑，從而達到只須用肉眼辨別顏色就能方便的從近似菌落中找出目的菌菌落的培養(yǎng)基。

幾種ISO、GB常見選擇性培養(yǎng)基及顯色培養(yǎng)基的培養(yǎng)基配方及菌落特征分析：

一、大腸桿菌在結(jié)晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂（VRBGA）上的菌落特征

原理：蛋白胨和酵母粉提供碳氮源和微量元素；乳糖是可發(fā)酵的糖類；氯化鈉可維持均衡的滲透壓；膽鹽和結(jié)晶紫抑制革蘭氏陽性菌，特別抑制革蘭氏陽性桿菌和糞鏈球菌；中性紅為pH指示劑。

用法：稱取本品41.5g，加熱溶解于1000mL蒸餾水中，煮沸不要超過2分鐘。取適宜稀釋度樣品液1mL，加入到無菌平皿中心，將冷至45±0.5℃的VRBA 10-15mL傾注于平皿中。小心旋轉(zhuǎn)平皿將培養(yǎng)基與樣液充分混勻。凝固后，再加3-4mL VRBA 覆蓋 平板表層，翻轉(zhuǎn)平板，置于36±1℃培養(yǎng)18-24小時。無需高壓滅菌。臨用時制備，不得超過3小時。

典型特征：結(jié)晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂(VRBGA) 又稱作腸道菌計數(shù)瓊脂，根據(jù)FDA BAM方法，腸桿菌細菌在該培養(yǎng)基上可生成有或無沉淀環(huán)的粉紅色至紅色菌落，直徑0.5mm，或更大。

二、沙門氏菌在木糖賴氨酸脫氧膽酸瓊脂（XLD）上的菌落特征

原理：酵母浸粉提供氮源、維生素、生長因子； 氯化鈉維持均衡的滲透壓；木塘、乳糖、蔗糖為可發(fā)酵糖類，產(chǎn)酸使苯酚紅指示劑變黃；去氧膽酸鈉抑制革蘭氏陽性菌，但不影響沙門氏菌的生長；硫代硫酸鈉可被某些細菌還原硫化氫，與檸檬酸鐵銨中的鐵鹽生成黑色硫化鐵；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑；苯酚紅為pH指示劑。

用法：稱取本品5.7g，加熱攪拌溶解于100mL蒸餾水中，不要過分加熱，冷至50℃左右時,傾入無菌平皿，部分開蓋干燥2h，然后蓋上，備用。無需高壓滅菌。在24小時內(nèi)使用。

典型特征：木糖賴氨酸脫氧膽酸瓊脂(XLD) 中的酵母粉為細菌生長提供維生素和輔助因子，木糖、乳糖和蔗糖作為可發(fā)酵的碳源。除志賀菌外，其他大多數(shù)腸桿菌均發(fā)酵木糖，加入的賴氨酸是為了鑒別沙門氏菌。沙門發(fā)酵木糖產(chǎn)酸，形成酸性環(huán)境有利于該菌產(chǎn)生脫羧酶，從而使培養(yǎng)基的pH升高向堿性轉(zhuǎn)變，但可因其他菌發(fā)酵乳糖和蔗糖產(chǎn)生大量的酸而中和，在堿性條件下，硫代硫酸鈉及檸檬酸鐵銨與沙門菌產(chǎn)生的硫代氫反應(yīng)使菌落顏色呈黑色，酸性條件下下反應(yīng)被抑制。酚紅作為指示劑，NaCl維持培養(yǎng)基滲透壓，去氧膽鹽鈉抑制一般革蘭陽性菌生長，也可抑制大腸桿菌生長。根據(jù)ISO和GB、FDA BAM方法，沙門菌在木糖賴氨酸脫氧膽酸瓊脂（XLD）大多數(shù)可形成紅色帶黑心的菌落，約為2mm，光滑、濕潤、邊緣整齊，亞利桑那菌發(fā)酵乳糖，可形成帶黑心的黃色菌落。

三、金黃色葡萄球菌在甘露醇高鹽瓊脂上的菌落特征

原理：蛋白胨和牛肉粉提供氮源、維生素和生長因子；D-甘露醇為可發(fā)酵糖類；氯化鈉維持均衡的滲透壓；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑；酚紅為pH指示劑。

用法：稱取本品109.0g，加入1000mL蒸餾水中，加熱溶解并不停攪拌煮沸 1 分鐘。121℃高壓滅菌15分鐘，冷至 45-50℃左右時,傾入無菌平皿。

典型特征：甘露醇高鹽瓊脂中的NaCl能夠抑制不耐鹽的非葡萄球菌生長，D-甘露醇為碳源，酚紅指示劑，凝固酶陽性菌能利用D-甘露醇產(chǎn)酸使酚紅由紅色變黃色。

四、產(chǎn)氣莢膜梭菌在哥倫比亞血瓊脂基礎(chǔ)的菌落特征

原理：酪蛋白胰酶消化物、肉胃酶消化物、心胰酶消化物和酵母浸出粉提供碳氮源、維生素和氨基酸；淀粉能促進奈瑟氏菌的生長和增強鏈球菌的溶血特性；氯化鈉維持均衡的滲透壓；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。

用法：稱取本品 39克，加熱溶解于1000mL蒸餾水中，分裝，121℃高壓滅菌15分鐘，冷至45-50℃左右時，加入相當(dāng)于20mg慶大霉素的無菌硫酸慶大霉素，混勻，傾入無菌平皿。

典型特征：產(chǎn)氣莢膜梭菌在血平板上多數(shù)有雙層溶血環(huán)，內(nèi)環(huán)完全溶血，是由于θ毒素的作用，外環(huán)不完全溶血是因為α毒素所致。

五、白色念珠菌在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上的菌落特征

原理：馬鈴薯浸出粉有助于各種霉菌的生長；葡萄糖提供能源；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。

用法：稱取本品 46.0g，加入 1000mL蒸餾水中，115℃高壓滅菌 20分鐘，備用。滅菌好的培養(yǎng)基僅可重復(fù)加熱熔化一次。

典型特征：白色念珠菌在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上的菌落特征為乳白色菌落，有突起，在加有氯霉素的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上，菌落表面呈奶油色。

六、綠膿桿菌在十六烷三甲基溴化銨瓊脂上的菌落特征

原理：蛋白胨和牛肉膏粉提供碳氮源、維生素和生長因子；氯化鈉維持均衡的滲透壓；十六烷三甲基溴化銨為選擇性抑菌劑，作為一種季銨鹽陽離子去污劑可釋放細菌細胞中的氮和磷而抑制非綠膿桿菌的細菌；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。

用法：稱取本品 32.3g，煮沸溶解于1000mL純化水中，分裝三角瓶，121℃高壓滅菌 15 分鐘, 備用。

典型特征：綠膿桿菌在十六烷三甲基溴化銨瓊脂上，綠膿桿菌菌落扁平無定型，向周邊擴散或略有蔓延趨勢，菌落呈灰白色，周圍有水溶性色素。

七、單增李斯特在李斯特菌選擇性瓊脂上的菌落特征

原理：胰蛋白胨、多價胨和牛肉粉提供氮源、維生素和生長因子；葡萄糖提供碳源；氯化鈉維持均衡的滲透壓；磷酸氫二鈉為緩沖劑；甘氨酸、氯化鋰、苯乙醇和復(fù)達欣可抑制非李斯特氏菌以外的部分革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。

用法：稱取本品 48g，加熱溶解于1000mL 蒸餾水中，分裝三角瓶，每瓶100mL，121℃高壓滅菌15分鐘，冷至50-55℃時，每瓶加入1支復(fù)達欣(3mg)，混勻，傾入無菌平皿備用。

典型特征：單增李斯特在李斯特菌選擇性瓊脂平板上，單核細胞增生李斯特菌培養(yǎng)后生成藍色菌落，菌落周圍有一不透明環(huán)。

八、阪崎腸桿菌在阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基上的菌落特征

用法：稱取本品8.62g 加入200mL蒸餾水，加熱煮沸完全溶解，121℃高壓滅菌15min，冷至50℃左右時，傾入無菌平皿。

貯存：制備好的平板可保存2-5天，應(yīng)避免光線直接照射。干燥培養(yǎng)基應(yīng)放置于陰暗干燥處， 保存溫度2-8℃，注意避光保存。

失效：干燥培養(yǎng)基超過保質(zhì)期、結(jié)塊和顏色變化都不能使用。

操作步驟：

1、用接種環(huán)接種mLST-Vm肉湯或EE肉湯增菌液10µl劃線或涂布于阪崎腸桿菌顯色平板上；

2、倒置放入培養(yǎng)箱36±1℃培養(yǎng)22-26h，典型的阪崎腸桿菌為藍-綠色菌落；

3、挑取典型菌落做生化試驗。

典型特征：

典型的阪崎腸桿菌為藍-綠色菌落，其它菌為無色、乳白色或黃色菌落。

阪崎腸桿菌生長代謝時產(chǎn)生葡萄糖苷酶，與培養(yǎng)基中經(jīng)過酶切釋放出顯色基團，使菌體呈藍綠色菌落。

九、蠟樣芽胞桿菌在甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂培養(yǎng)基上的菌落特征

原理：蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、維生素和生長因子；D-甘露醇為可發(fā)酵糖類；氯化鈉維持均衡的滲透壓；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑；酚紅為pH指示劑；卵黃含有卵磷脂，蠟樣芽孢桿菌產(chǎn)生卵磷脂酶，在菌落周圍產(chǎn)生沉淀環(huán)；并不發(fā)酵D-甘露醇產(chǎn)酸使菌落顯紅色；多粘菌素B可抑制雜菌的生長。

用法：稱取本品4.6g，加熱溶解于100mL蒸餾水中，經(jīng)121℃高壓 滅菌 15 分鐘，待培養(yǎng)基冷卻至50℃時，每瓶加入50%卵黃乳液5ml及多粘菌素 B 10000IU，搖勻，傾入無菌平皿。

典型特征：甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂中的甘露醇提供碳源，發(fā)酵甘露醇的細菌在該培養(yǎng)基上生長產(chǎn)酸使菌落變黃色。產(chǎn)卵磷脂酶的細菌水解培養(yǎng)基中的卵磷脂，使菌落周圍形成白色沉淀環(huán)。由于蠟樣芽胞桿菌不發(fā)酵甘露醇和產(chǎn)生卵磷脂酶，因此菌落呈粉紅色，周圍為白色沉淀環(huán)。

十、乳酸菌在MRSA培養(yǎng)基上的菌落特征

原理：蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸粉提供氮源、維生素、生長因子；葡萄糖為可發(fā)酵糖類；磷酸氫二鉀為酸堿緩沖劑；檸檬酸氫二銨、硫酸鎂、硫酸錳、吐溫-80和乙酸鈉為培養(yǎng)各種乳酸菌提供生長因子，其成分還能抑制某些雜菌；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。

用法：稱取本品 66.2g，加熱溶解于1000mL蒸餾水中，121℃高壓滅菌 15 分鐘備用。

典型特征：在MRSA上，乳菌菌形成了白色菌落，菌落較大。