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什么是引物?如何溶解和保存引物?

2022-10-11 10:54 來源:上海遠(yuǎn)慕生物試劑
什么是引物?

引物(primer),是一小段單鏈DNA或RNA,作為DNA復(fù)制的起始點,在核酸合成反應(yīng)時,作為每個多核苷酸鏈進行延伸的出發(fā)點而起作用的多核苷酸鏈,在引物的3′-OH上,核苷酸以二酯鏈形式進行合成,因此引物的3′-OH,必須是游離的。

如何溶解引物?

干燥后的引物質(zhì)地非常疏松,開蓋前最好瞬時離心一下,或管垂直向上在桌面上敲敲,將引物粉末收集到管底。根據(jù)計算出的體積加入去離子無菌水或TE(pH8.0)緩沖液,室溫放置幾分鐘,振蕩助溶,離心將溶液收集到管底。溶解引物用的水一般不要用蒸餾水,因為有些蒸餾水的pH值比較低(pH4-5),引物在這種條件下不穩(wěn)定。

如何保存引物?

引物合成后,經(jīng)過一系列處理和純化步驟,旋轉(zhuǎn)干燥而成無色或白色絮狀干粉。

干 粉:運輸時常溫運輸,-20℃可以保存一年。

儲存液:配好后分裝成幾管,避免反復(fù)凍融,-20℃可以保存半年。

工作液:常規(guī)使用,4℃保存,也可-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

修飾熒光引物:需要避光保存,盡快使用為宜。

引物設(shè)計的基本原則:

1、引物長度:15-30bp,常用為20bp左右。

2、引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C 過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列參照。

3、引物內(nèi)部不應(yīng)出現(xiàn)互補序列。

4、兩個引物之間不應(yīng)存在互補序列,尤其是避免3 ′端的互補重疊。

5、引物與非特異擴增區(qū)的序列的同源性不要超過70%,引物3′末端連續(xù)8個堿基在待擴增區(qū)以外不能有完全互補序列。
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