石蠟組織切片制作全過程分享！

(一)石蠟切片注意事項

(1)組織脫水、透明和浸蠟  在脫水過程中，所用各級酒精的純度應盡量保持，以便將組織內的水分徹底脫去。在無水酒精中的時間不宜過長，以防組織過硬，造成切片不順暢。如果無水酒精中含有水分，則組織脫水不徹底。這種含有水分的組織二甲苯不能完全浸入，造成切片無法透明而呈現(xiàn)混濁現(xiàn)象。此時可將組織重行在新無水酒精中脫水。透明所用二甲苯應保持純度，否則透明難以充分，不利于石蠟滲透。組織在二甲苯中的時間需要嚴格掌握，時間過長則組織脆硬易碎，時間過短石蠟不易浸入。因為透明所需時間較短，所以透明時間必須注意。浸蠟的溫度不可以過高，一般應調節(jié)在54～56℃。溫度過高時會使組織變脆。浸蠟時間應適當嚴格控制。

(2)包埋  石蠟溫度不可過高，以防燙傷組織。所用鑷子也不可燒得過燙，以免在取組織時灼傷組織，造成切片制成后的不良后果。包埋時應根據(jù)觀察需要而選擇組織塊擺放方向。

(3)石蠟切片  切片刀要鋒利，否則切片時會自行卷起，導致不能順利將切片切成連續(xù)的條帶狀。切片刀如有缺口存在，切片會斷裂、破碎和不完整。切片機各個零件和螺絲應旋緊，否則產生震動可導致切片厚薄不均。在搖動切片機時用力要均勻，避免震動。遇有較硬的腦、肝臟、脾臟等組織時，應輕搖切片，以防組織由于震動而形成空洞現(xiàn)象。切片刀放置角度以200～300為好。過大則切片上卷，不能連接一起，過小則切片皺起。

(二)染色時注意事項

(1)作為染料的溶媒主要是蒸餾水和酒精，以蒸餾水為多。采用濃度較稀的染色液時，組織切片要經過較長時間的浸染才可以得到滿意的染色效果。如果組織切片不易著色，可采用濃度較高的染色劑。染色劑pH與染色作用關系密切。染液或試劑有沉淀，用前應過濾。

(2)組織切片的脫蠟應徹底，否則染色效果不好，染色時間的長短需根據(jù)染色液對組織的染色作用、染色時的室溫條件、切片的厚薄、固定液的類別以及染色液的新舊等有所變異，染色時可使用顯微鏡觀察染色程度。一般增高溫度可促進染色，冬季室溫低時需加溫。

(3)分化是染色成敗的關鍵。分化不當會引起染色不均、過淡或過深等現(xiàn)象。因此有必要在顯微鏡下觀察來進行控制。組織切片脫水、透明等步驟必須徹底，否則切片呈云霧狀。

(4)組織切片封固時，應注意中性樹膠的濃度，以能滴下成珠為好，如果過稀則易于溢出蓋玻片，而且二甲苯揮發(fā)后的組織切片會因樹膠收縮而產生氣泡；如果過濃則在加上蓋玻片后，樹膠不易散開，出現(xiàn)氣泡時不易除去。

封固組織切片時，切片上可剩余適量二甲苯，過多或過少均可引起封固時產生氣泡。若切片見有少數(shù)氣泡時，可用眼科小鑷子輕壓消除。樹膠封固時要注意避免口、鼻呼出氣體接觸到載玻片，否則切片呈云霧狀。在潮濕的環(huán)境里，封固動作必須快速。樹膠不要滴得過多，以免溢出蓋玻片，但太少又不能到達蓋玻片邊緣。

(5)組織切片在染色前應遮蓋保存，以防灰塵落入。染后的切片應妥善保存，避免日光照射而褪色。在染色過程中，組織切片偶有脫離玻片現(xiàn)象，原因如下：載玻片不清潔；附片時的水溫過低；烤片時間不足或烤片溫度不夠而急于染色；組織塊脫水不好，影響后續(xù)的浸蠟和切片過程；組織過干或過硬，難切成片；浸蠟時間過長可致組織硬脆。