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動(dòng)物血清的正確熱滅活方法

2022-09-27 11:01 來(lái)源:上海遠(yuǎn)慕生物試劑
動(dòng)物血清的熱滅活非常容易造成蛋白析出增多,若非必要,可以無(wú)需做此操作。若必須做動(dòng)物血清的熱滅活,請(qǐng)嚴(yán)格遵守以下步驟:

1、保證血清完全融化狀態(tài),溫度接近常溫。

2、保證水浴溫度56℃、30分鐘的原則,在水浴過(guò)程中每隔2-3分鐘搖晃瓶子,使血清內(nèi)部受熱均勻,直至滅活時(shí)間結(jié)束。

注意事項(xiàng):

溫度過(guò)高、時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻,都會(huì)造成沉淀物的增多,甚至嚴(yán)重影響血清的品質(zhì)。在56℃水浴中,持續(xù)恒溫30分鐘。在此過(guò)程中每隔2-3分鐘搖晃瓶子,使其受熱均勻,減少蛋白的析出。
為什么要熱滅活血清?

加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,刺激平滑肌收縮,細(xì)胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在免疫學(xué)研究,培養(yǎng)ES細(xì)胞,昆蟲(chóng)細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí),推薦使用熱滅活血清。

實(shí)驗(yàn)顯示,經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清,對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過(guò)的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn),或沒(méi)有任何作用,甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量,而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清,沉淀物的形成會(huì)顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是小黑點(diǎn),常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,又會(huì)使此沉淀物更增多,使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。若非必須,可以不需要做熱處理這一步。不但節(jié)省時(shí)間,更確保血清的質(zhì)量!

遠(yuǎn)慕生物解析血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn):

1. 牛血清必須來(lái)自有文件證明無(wú)牛海綿狀腦病的牛群或國(guó)家。并應(yīng)具備適當(dāng)?shù)谋O(jiān)測(cè)系統(tǒng)。

2. 證明所用牛血清中不含對(duì)所生產(chǎn)疫苗病毒的抑制物。

3. 有些國(guó)家還要求牛血清來(lái)自未用過(guò)反芻動(dòng)物蛋白飼料的牛群。

4. 無(wú)細(xì)菌、霉菌、支原體和病毒的污染,有些國(guó)家要求無(wú)細(xì)菌噬菌體污染。

5. 對(duì)細(xì)胞有良好的支持繁殖作用。

6. 血清要通過(guò)濾膜過(guò)濾除菌,無(wú)菌
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