支原體污染的影響是什么？如何應對呢？

細胞培養(yǎng)過程中，由于實驗環(huán)境、操作者鼻腔口腔、實驗器材等很多地方都有支原體的存在。因此，細胞發(fā)生支原體污染的頻率很高。據(jù)美國數(shù)據(jù)統(tǒng)計，細胞發(fā)生支原體污染的幾率在70%以上。

同時，由于支原體直徑很小，僅在180nm~350nm之間，只有通過電鏡才能看到。因此，支原體污染不易被實驗者肉眼發(fā)覺。而支原體污染是個循序的過程，普通抗生素對其無效。因此，被支原體污染的細胞會持續(xù)受到影響，導致實驗數(shù)據(jù)不準確。

支原體污染不僅是細胞培養(yǎng)中需要克服的現(xiàn)象，而且是制藥、生物制品生產(chǎn)中需要加以避免的。支原體污染的影響是什么？

●抑制細胞增殖達50%

●影響免疫反應

●影響病毒增殖和感染率

●引起染色體畸變和易位

●干擾雜交瘤技術使被污染細胞在HAT培養(yǎng)基更敏感

●在細胞壁上附著支原體會改變細胞壁完整性。

●降低電穿孔轉染率達5%

總之，支原體污染影響細胞所有的代謝功能。

細胞被支原體污染，解決方案

方法一：確認細胞已被支原體污染，終止試驗，丟棄所有被污染的細胞和耗材。

重新復蘇細胞，注意選用未被污染的細胞株、血清和培養(yǎng)基，并規(guī)范操作。

方法二：對于珍貴的，樣品不可再得的細胞，或價格昂貴的種子細胞，不但無法丟棄，而且作為種子細胞，還需要徹底根除支原體污染。

此時，需選用特異性的支原體殺除劑，清除污染，保護細胞。

方法三：對于已耗費很多時間，大量擴增起來的細胞，或經(jīng)過基因轉染、體外刺激等大量工作處理過的細胞，如果發(fā)現(xiàn)細胞被支原體污染了，怎么辦？此時由于前期工作量巨大，使操作人員無法丟棄已有細胞。

但由于價格原因，又無法使用方法二提到的昂貴試劑殺除細胞上的支原體，

同時，實驗人員還需要清除細胞上的支原體污染，讓實驗得以往下推進，以最終獲得準確的實驗數(shù)據(jù)。

此時，實驗者可選用對支原體特效的抑制劑，通過對細胞的前期處理，中期加藥，逐步通過4代左右的培養(yǎng)，得以將支原體污染徹底清除，確保試驗順利推進，結果準確。

工作環(huán)境中支原體污染，解決方案

如果實驗室的細胞經(jīng)常發(fā)生支原體污染，則需考慮的污染源可能來以下幾個方面：

1、細胞種子被污染，解決方法參見以上“方法二”和“方法三”；

2、細胞培養(yǎng)中，使用未經(jīng)嚴格過濾祛除支原體的牛血清。

某些血清生產(chǎn)廠，為低價占領市場同時還能獲得充足利潤，他們需要降低生產(chǎn)成本，所以會將生產(chǎn)中，成本最高的100nm過濾三次的步驟縮減，導致血清成為支原體的污染源。

(全球標準的血清生產(chǎn)規(guī)范為：粗血清需經(jīng)七次過濾，最后三次為100nm加壓過濾，可以清除支原體)；

此情況需詳細考察血清供貨商的專業(yè)程度，通過索要《檢測報告》等書面文件為血清獲得更多質(zhì)量保證。同時，對專業(yè)水平不高的血清供貨商，適當延長血清試用期。

3、潔凈臺、細胞培養(yǎng)箱內(nèi)部、培養(yǎng)箱水槽、液氮罐，培養(yǎng)間內(nèi)部的水浴鍋等環(huán)境被支原體污染，可對工作區(qū)域進行消毒。

總之，細胞培養(yǎng)中，支原體污染發(fā)生頻繁。有時帶來的危害會造成實驗的巨大損失。應經(jīng)常檢測和及時排除支原體污染，讓細胞在健康安全的環(huán)境下生長，為獲得準確的實驗結果，打下良好的基礎。