遠慕技術：細胞傷口愈合實驗

實驗試劑

DMEM培養(yǎng)基

胎牛血清

PBS

BD24孔細胞培養(yǎng)板

Raininpipettips,1ml

戊二醛

乙醇

結晶紫

實驗設備

細胞培養(yǎng)儀：37°Cand5%CO2

實驗材料

人MDA-MB-231cell

實驗步驟

1. 細胞在含有10%FBS的DMEM培養(yǎng)基中生長。

2. 細胞以一定密度接種到24孔細胞培養(yǎng)板中，生長24小時后，單層細胞融合度應達到70-80%。

3. 不要geng換培養(yǎng)基。用新的1ml槍頭輕輕的在單層培養(yǎng)細胞間劃痕，劃痕橫穿過孔，槍頭盡量與板孔的底部垂直，不要傾斜。這樣產(chǎn)生的gap的距離才與槍頭末端的外直徑相等。Gap的距離可以選用不同型號的槍頭調(diào)節(jié)。劃痕在同一方向成一條直線。

4. 在垂直與第一條劃痕的方向制作另一條劃痕，每孔劃痕成十字交叉型。

5. 劃痕后，用培養(yǎng)基輕輕的清洗板孔2次，以去除脫落細胞。

6. 每孔添加新鮮培養(yǎng)基。

7. (培養(yǎng)基中含有某些成分，如抑制/促進細胞遷移和/或增殖的化學物質(zhì))。

8. 細胞生長48小時(或根據(jù)時間需要)。

9. 1xPBS清洗細胞兩次，然后使用3.7%多聚甲醛固定30分鐘。

10. 0.1%的結晶紫(2%乙醇溶解)染色30分鐘。

11. 染色的單層細胞選取不同的視野，顯微鏡拍照。gap的距離可通過Photoshop或ImagJ軟件測量.為了降低實驗結果的可變性，建議每孔選擇多個視野觀察，每組做多個重復。