凍存的細胞該如何開始培養(yǎng)？

⑴將一管細胞從液氮罐中取出，注意保護手和眼睛。

  ⑵用10秒鐘時間將小管的蓋子擰松1/4以去除殘留在螺紋處的液氮，然后將蓋子蓋緊。

  ⑶將小管放入37℃水浴中，輕輕握住并旋轉(zhuǎn)，直到管內(nèi)物體完全融化。

  ⑷將小管立即從水浴中拿出，擦干，轉(zhuǎn)入無菌環(huán)境。

  ⑸用70％的酒精沖洗小管，然后擦去多余酒精。

  ⑹打開蓋子，注意手指不要碰到里面的螺紋。用1ml離心管離心內(nèi)容物。

  ⑺平衡管內(nèi)物，用多聚賴氨酸包被培養(yǎng)瓶(多數(shù)細胞用T-75的培養(yǎng)瓶)。多數(shù)細胞類型推薦接種密度為每平方厘米5000細胞。

  ⑻蓋好蓋子，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以使細胞分布均勻。若需要氣體交換可打開蓋子。

  ⑼將培養(yǎng)瓶放放培養(yǎng)箱中(37℃,5%CO2,95%空氣)

  ⑽植入培養(yǎng)后第6-16小時更換一次培養(yǎng)基以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細胞。
生物試劑的使用常識：

（1）試劑切忌與手接觸（有些試劑有強腐蝕性、等特性）。

（2）要用潔凈的藥勺，量筒或滴管取用試劑，絕對不允許用同一種工具同時連續(xù)取用多種試劑。取完一種試劑后，應(yīng)將工具洗凈（藥勺要擦干）后，才可取用另一種試劑。

（3）試劑取用后一定要將瓶塞蓋緊，不可放錯瓶蓋和滴管，絕不允許張冠李戴，用完后請及時將瓶放回原處，以免遺忘，帶來不便。

（4）已取出的試劑不能再放回原試劑瓶內(nèi)（怕產(chǎn)生原試劑的再次污染）。

處理提示：

1、購買后，請務(wù)必確認標(biāo)簽上的注意事項。

2、做好預(yù)防顛倒，摔壞的措施和管理體制。

3、在使用前再次確認標(biāo)簽上的注意事項。做好必要的安全對策。

4、對沒有標(biāo)明其危險特性，有害特性的，也要慎重地進行操作。

5、必須戴好防護用具，小心翼翼進行操作。

6、請參照相關(guān)法規(guī)，文獻，MSDS等信息，理解并掌握好試劑的特性，再進行安全操作。

7、通常購買試劑時要想到一次性用完。若估算不足有剩余的話，要更加注意其保管和管理。

8、萬一試劑操作者并非專業(yè)技術(shù)人員。必須在專業(yè)人士的指導(dǎo)監(jiān)督下進行操作。

9、對于使用后的廢棄物，不要或舊的試劑，應(yīng)按照相關(guān)法律法規(guī)正當(dāng)處理。