細(xì)胞培養(yǎng)常見(jiàn)問(wèn)題及其解決！

細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中用量最多的就是細(xì)胞培養(yǎng)基，雖然細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)基本技術(shù)大同小異，但是每種細(xì)胞的培養(yǎng)條件卻相差甚遠(yuǎn)。若偏離某種細(xì)胞所需的培養(yǎng)條件，則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞表達(dá)不同的表型

因此，在實(shí)驗(yàn)前，需要熟悉自己所使用的細(xì)胞系，并在實(shí)驗(yàn)中嚴(yán)格遵守所有產(chǎn)品的操作說(shuō)明。

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，作為實(shí)驗(yàn)小白，我們應(yīng)該如何應(yīng)對(duì)相關(guān)問(wèn)題呢？
 
首先，我們要如何挑選適合自己細(xì)胞生長(zhǎng)的培養(yǎng)基呢？

選擇培養(yǎng)基沒(méi)有確切的標(biāo)準(zhǔn)，有幾點(diǎn)建議可供參考：

建立某種細(xì)胞株所用的培養(yǎng)基應(yīng)該是培養(yǎng)這種細(xì)胞首選的培養(yǎng)基?？梢圆殚咥TCC或在購(gòu)買細(xì)胞株時(shí)咨詢供應(yīng)商。

根據(jù)細(xì)胞株的特點(diǎn)、實(shí)驗(yàn)的需要來(lái)選擇培養(yǎng)基。如小鼠細(xì)胞株多選RPMI1640。

其他實(shí)驗(yàn)室慣用的培養(yǎng)基不妨一試，許多培養(yǎng)基可以適合多種細(xì)胞。

也可用多種培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，觀察其生長(zhǎng)狀態(tài)，可以用生長(zhǎng)曲線、集落形成率等指標(biāo)判斷，根據(jù)實(shí)驗(yàn)室結(jié)果選擇最佳培養(yǎng)基，這是最客觀的方法，但比較繁瑣。

如何正確地保存培養(yǎng)基？

普通的培養(yǎng)基放置在2-8℃冰箱避光保存，若已開封建議3周內(nèi)使用。未開封的培養(yǎng)基，一般可穩(wěn)定保存1年。

培養(yǎng)基中酚紅的作用是什么？導(dǎo)致培養(yǎng)基顏色變化的原因有哪些？

酚紅在培養(yǎng)基中被用來(lái)作為pH值的指示劑：中性時(shí)為紅色，酸性時(shí)為黃色，堿性時(shí)為紫色。

培養(yǎng)基顏色變黃，原因有：培養(yǎng)基中細(xì)胞代謝產(chǎn)物為酸性，培養(yǎng)瓶受污染，細(xì)菌代謝產(chǎn)酸等導(dǎo)致。

培養(yǎng)基顏色偏暗紅色，原因有：培養(yǎng)基保存在4℃冰箱中，培養(yǎng)基內(nèi)的二氧化碳逐漸溢出，造成培養(yǎng)基越來(lái)越偏堿性，而培養(yǎng)基中的酸堿指示劑酚紅會(huì)隨著堿性增加而更偏暗紅。

我感覺(jué)自己的培養(yǎng)基污染了，這要怎么進(jìn)行測(cè)試呢？

取0.1ml液體培養(yǎng)基涂布到無(wú)菌蛋白棟牛肉膏培養(yǎng)基上37℃培養(yǎng)24h，觀察有無(wú)雜菌生長(zhǎng)（肉眼即可觀察到）。

如果我的培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后，可長(zhǎng)期保存嗎？

一旦培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素，建議避光保存在4℃冰箱且在2周內(nèi)用完。因?yàn)橐恍┛股睾脱宓幕境煞衷诮鈨龊缶烷_始降解了。

哇！我的培養(yǎng)基怎么有沉淀了，這是怎么回事？怎么預(yù)防處理沉淀？

首先判斷培養(yǎng)基是否已經(jīng)污染，其次，若沉淀為絮狀沉淀則可能是加入血清引起的，此沉淀對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)無(wú)影響。若沉淀為結(jié)晶，有可能是因?yàn)橄蚺囵B(yǎng)基里加入的輔助試劑降低了培養(yǎng)基的溶解度，使一些無(wú)機(jī)鹽析出。

可應(yīng)用離心、過(guò)濾的方法去除這些沉淀，盡可能地減少血清凍融次數(shù)。

那我什么情況下可以使用不加酚紅的培養(yǎng)基呢？

研究表明，酚紅可以模擬固醇類激素（特別是雌激素）的作用。為避免固醇類反應(yīng)，培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，用不加酚紅的培養(yǎng)基；一些研究人員在做流式細(xì)胞檢測(cè)時(shí)，為了避免酚紅干擾檢測(cè)，也使用不加酚紅的培養(yǎng)基。

為什么培養(yǎng)基中會(huì)含有L-谷氨酰胺和丙酮酸鈉，它們的作用是什么？

L-谷氨酰胺脫掉氨基后可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來(lái)源參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源。盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是如果沒(méi)有葡萄糖的話，細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉。