細胞培養(yǎng)——揭開細胞凍存與復(fù)蘇的秘密

在美國科幻大片中，經(jīng)常會有因為某些特殊原因被凍存起來的超人，醒來已經(jīng)過了百年，容顏依舊、身體機能依舊，依然可以拯救人類。這其中就涉及到一個細胞凍存的概念，細胞凍存是將細胞放在低溫環(huán)境，減少細胞代謝，以便長期儲存的一種技術(shù)。細胞凍存是細胞保存的主要方法之一，起到了細胞保種的作用。其實自己也可以動手來做關(guān)于細胞凍存的實驗，下面就來具體看看如何實施吧！

細胞凍存操作步驟

1.用移液器吸走原培養(yǎng)基，加入適量PBS洗1-2遍；

2.加入適量胰酶，置于培養(yǎng)箱中消化；

3.待消化到位后加入適量血清或完全培養(yǎng)基終止消化，800-1000rpm離心3-5min；

4.配制凍存液，待細胞離心后去上清，加入凍存液重懸，調(diào)整細胞濃度為3×106~1×107?cells/mL，轉(zhuǎn)移到凍存管中；

5.將凍存管放入程序降溫盒中，-80度過夜，然后轉(zhuǎn)移到液氮中保存。

6.凍存細胞后應(yīng)取出一管復(fù)蘇，檢測細胞的存活率。理論上細胞可在液氮內(nèi)長期保存，為穩(wěn)妥起見可在細胞凍存半年后復(fù)蘇培養(yǎng)，觀察細胞生長情況，再繼續(xù)凍存。

細胞凍存注意事項

1.凍存液常規(guī)配比為培養(yǎng)基：血清：DMSO=7:2:1，如果細胞比較珍貴，可以調(diào)整為血清：DMSO=9:1；

2.如果沒有程序降溫盒，可以將凍存細胞依次放于4度1h，-20度2h，-80過夜，再轉(zhuǎn)至液氮罐內(nèi)；

3.凍存細胞儲存在-80度中通常不建議超過半年，液氮中通常不建議超過2年；

4.細胞如果是第一次養(yǎng)，建議至少凍存兩個批次以上，以盡量避免因為凍存問題導(dǎo)致細胞絕種；

細胞復(fù)蘇操作步驟

1.準備工作：開啟恒溫水浴鍋，將溫度調(diào)節(jié)在37℃，取一離心管，加入5ml細胞培養(yǎng)基；

2.取出凍存管，立即放入水浴鍋中快速搖晃，讓凍存液迅速融化；

3.打開凍存管，將凍存液小心轉(zhuǎn)移到預(yù)先加入有培養(yǎng)基的離心管中，800rpm離心5分鐘；

4.小心棄掉上清，加入約5ml培養(yǎng)基重懸細胞；

5.將所得細胞懸液轉(zhuǎn)移入培養(yǎng)瓶中，蓋上瓶塞，置培養(yǎng)箱培養(yǎng)，觀察細胞的狀態(tài)；