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毒扁豆堿對(duì)乙酰膽堿作用的影響實(shí)驗(yàn)的操作步驟

2018-10-22 16:35 來源:上海遠(yuǎn)慕生物試劑
毒扁豆堿(Physostigmine),別名依色林、卡拉巴豆堿、依色林,是一種白色、無味,微結(jié)晶樣粉末的生物堿化學(xué)品?;瘜W(xué)名稱1,2,3,3A-六氫-1,3A,8-三甲基吡咯并[2,3-B]吲哚-5-酚甲基氨基甲酸酯,分子式為C15H21N3O2 ,分子量為275.34600 ,微溶于水,易溶于乙醇,極易溶于氯仿和二氯甲烷,溶于不揮發(fā)性油和苯,熔點(diǎn)102~104℃。毒扁豆堿為抗膽堿酯酶藥,臨床上主要有縮瞳、降低眼壓作用。

本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖菍W(xué)習(xí)研究藥物量效關(guān)系的實(shí)驗(yàn)條件。觀察不同濃度乙酰膽堿對(duì)離體蟾蜍腹直肌的影響。觀察毒扁豆堿對(duì)乙酰膽堿作用的影響以及學(xué)習(xí)累積劑量效應(yīng)曲線的繪制方法。

實(shí)驗(yàn)步驟:

1.  連接好實(shí)驗(yàn)裝置,保證實(shí)驗(yàn)條件。
 
2.  記錄裝置的條件:將臺(tái)式平衡記錄儀量程旋紐置于 5 mv,打開記錄筆將筆調(diào)到記錄 的合適位置。?。?nbsp;g 砝碼懸掛在換能器的小鉤上,調(diào)節(jié)載波放大器的“增益”、“調(diào)零”旋 鈕,使記錄筆上升1大格(25 mm),取下砝碼后,記錄筆又到原位置(加砝碼時(shí)調(diào)“增益” 旋鈕,取下砝碼時(shí)調(diào)“調(diào)零”旋鈕,需要重復(fù)數(shù)次即可)。記錄速度 8 mm/min。
 
3.  標(biāo)本的制備:將蟾蜍破壞大腦與脊髓,背位固定于蛙板上,剪開腹部皮膚,在恥 骨上端以小鑷子分別穿線結(jié)扎左右腹直肌的肌腱,于結(jié)扎的下方剪斷肌建,沿腹白線向 上剪開(應(yīng)注意避免剪斷腹壁內(nèi)側(cè)的腹壁靜脈)以分離左右腹直肌,再沿腹直肌外緣向 上剪開,在第二腱劃高度分用線結(jié)扎兩側(cè)腹直肌,并在結(jié)扎線上方剪斷肌肉。標(biāo)本制成 后,以 Ringer 氏液洗凈,放入置有 Ringer 氏液的燒杯內(nèi),備用。
 
本實(shí)驗(yàn)選用蟾蜍腹直肌的理由是因?yàn)轶蛤芨怪奔?duì)乙酰膽堿較敏感,藥物作用較緩 和、穩(wěn)定,易于比較收縮的高度。
 
4.  標(biāo)本的懸掛:將腹直肌標(biāo)本一端固定在浴管底部,另一端懸掛于力位移換能制的 小鉤上。腹直肌的張力變化通過力位移換能器、載波放大器后,記錄在臺(tái)式平衡記錄儀 上。懸掛好標(biāo)本后, 立即換液1次,再給腹直肌標(biāo)本加前負(fù)荷 2 g(上升1大格、25 mm 即 可),穩(wěn)定 30 分鐘,即可加藥。
 
5.  給藥方法:按累積給藥法,先觀察各濃度乙酰膽堿收縮蟾蜍腹直肌的量效關(guān)系, 給藥順序見表 4-8。然后沖洗,先沖洗4-5次,再每隔 10 分鐘換液1次,待腹直肌標(biāo) 本重新恢復(fù)至基線(約 40 分鐘)后,加入 10-3 mol/L Physosti gmine(毒扁豆堿)0.1 ml,作用 15 分鐘后,仍按累積給藥法加入各度的乙酰膽堿,觀察毒 扁豆堿對(duì)乙酰膽堿量效關(guān)系的影響,給藥順序見表 4-9。

 

 
6.  繪制量效曲線:以乙酰膽堿引起收縮的最大高度為 100%,計(jì)算各濃度乙酰膽堿 收縮腹直肌的百分?jǐn)?shù)。計(jì)算方法如下:
 

 
繪制量效曲線時(shí),以收縮百分?jǐn)?shù)為縱座標(biāo),以乙酰膽堿濃度的負(fù)對(duì)數(shù)為橫座標(biāo),繪 制量效曲線(曲線A:乙酰膽堿收縮蟾蜍腹直肌的量效曲線;曲線B:毒扁豆堿預(yù)處理 后乙酰膽堿收縮蟾蜍腹直肌的量效曲線)。

 

 
 
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