細胞培養(yǎng)常用設備及實驗技巧
2016-12-26 15:21 來源：上海遠慕生物試劑
細胞培養(yǎng)常用設備及實驗技巧
常用設備
準備室的設備：
單蒸餾水蒸餾器、雙蒸餾水蒸餾器、酸缸、烤箱、高壓鍋、儲品柜(放置未消毒物品)、儲品規(guī)(放置消毒過的物品)、包裝臺。
配液室的設備：
扭力天平和電子天平(稱量藥品)、PH計(測量培養(yǎng)用液PH值)、磁力攪拌器(配置溶液室攪拌溶液)。
培養(yǎng)室的設備：
液氮罐、儲品柜(存放雜物)、日光燈和紫外燈、空氣凈化器系統(tǒng)、低溫冰箱(-80℃)、空調(diào)、二氧化碳缸瓶、邊臺(書寫實驗記錄)。必須放在無菌間的設備：離心機(收集細胞)、超凈工作臺、倒置顯微鏡、CO2孵箱(孵育培養(yǎng)物)、水浴鍋、三氧消毒殺菌機、4℃冰箱(放置serum和培養(yǎng)用液)。
無菌操作
無菌室的滅菌：
1.定期打掃無菌室：每周打掃一次，先用自來水拖地、擦桌子、超凈工作臺等，然后用3‰來蘇爾或者新潔爾滅或者0.5%過氧乙酸擦拭。
2.CO2孵箱(培養(yǎng)箱)滅菌：先用3‰新潔爾滅擦拭，然后用75%酒精擦拭或者0.5%過氧乙酸，再用紫外燈照射
3.實驗前滅菌：打開紫外燈、三氧殺菌機、空氣凈化器系統(tǒng)各20-30分鐘
4.實驗后滅菌：用75%酒精(3‰新潔爾滅)擦拭超凈臺、邊臺、倒置顯微鏡的載物臺。
實驗人員的無菌準備：
1.肥皂洗手。
2.穿好隔離衣、帶好隔離帽、口罩、放好拖鞋
3.用75%酒精棉球擦凈雙手。
無菌操作的演示：
1.凡是帶入超凈工作臺內(nèi)的酒精、PBS、培養(yǎng)基、胰蛋白酶的瓶子均要用75%酒精擦拭瓶子的外表面
2.靠近酒精燈火焰操作。
3.器皿使用前必須過火滅菌
4.繼續(xù)使用的器皿(如瓶蓋、滴管)要放在高處，使用時仍要過火。
5.各種操作要靠近酒精燈，動作要輕、準確，不能亂碰。如吸管不能碰到廢液缸。
6.吸取兩種以上的使用液時要注意更換吸管，防止交叉污染。
器械的清洗和消毒
玻璃器械洗消：
一、新的玻璃器皿的洗消：
1.自來水刷洗，除去灰塵。
2.烘干、泡鹽酸：烤箱中烘干，然后再浸入5%稀鹽酸中12小時以除去臟物、鉛、砷等物。
3.刷洗、烘干：12小時后立即用自來水沖洗，再用洗滌劑刷洗，自來水沖干凈后用烤箱烘干。
4.泡酸、清洗：用清潔液(重鉻酸鉀120g：濃硫酸200ml：蒸餾水1000ml)浸泡12小時，然后從酸缸內(nèi)撈出器皿用自來水沖洗15次，最后蒸餾水沖洗3-5次和用雙蒸水過3次。
5.烘干、包裝：洗干凈后先烘干，然后用牛皮紙(油光紙)包裝。
6.高壓消毒：包裝好的器皿裝入高壓鍋內(nèi)蓋好蓋子，打開開關和安全閥，當蒸氣成直線上升時，關閉安全閥，當指針指向15磅時，維持20-30分鐘。
7.高壓消毒后烘干
二、舊的玻璃器皿的洗消：
1.刷洗、烘干：使用過的玻璃器皿可直接泡入來蘇爾液或洗滌劑溶液中，泡過來蘇爾溶液(洗滌劑)的器皿要用清水刷洗干凈，然后烘干。
2.泡酸、清洗：烘干后泡入清潔液(酸液)，12小時后從酸缸內(nèi)撈出器皿立即用自來水沖洗(避免蛋白質(zhì)干涸后粘附于玻璃上難以清洗)，再用蒸餾水沖洗3次。
3.烘干、包裝：洗干凈的器皿烘干后取出用牛皮紙(油光紙)等包裝，以便于消毒儲存及防止灰塵和再次被污染。
4.高壓消毒：包裝好的器皿裝入高壓鍋內(nèi)，蓋好蓋子，打開開關和安全閥，隨著溫度的上升安全閥冒出蒸氣，當蒸氣成直線冒出3-5分鐘后，關閉安全閥，氣壓表指數(shù)隨之上升，當指針指向15磅時，調(diào)節(jié)電開關維持20-30分鐘即可。(玻璃培養(yǎng)瓶消毒前可將膠帽輕輕蓋上)
5.烘干備用：因為高壓消毒后器皿會被蒸氣打濕，所以要放入烤箱內(nèi)烘干備用。
金屬器械洗消：
金屬器皿不能泡酸，洗消時可先用洗滌劑刷洗，后用自來水沖干凈，然后用75%酒精擦拭，再用自來水，然后用蒸餾水沖洗，再烘干或空氣中晾干。放入鋁制盒內(nèi)包裝好在高壓鍋內(nèi)15磅高壓(30分鐘)消毒，再烘干備用。
橡膠和塑料：
橡膠和制品通常處理方法是：先用洗滌劑洗刷干凈，再分別用自來水和蒸餾水沖干凈，再用烤箱烘干，然后根據(jù)不同品質(zhì)進行如下的處理程序：
1.針式濾器帽不能泡酸液,用NaOH泡6-12小時,或者煮沸20分鐘,在包裝之前要裝好濾膜兩張，安裝濾膜時注意光面朝上(凹向上)，然后將螺旋稍微擰松一些，放入鋁盒中在高壓鍋內(nèi)15磅30分鐘消毒，再烘干備用。注意在超凈臺內(nèi)取出使用時應該立即將螺旋旋緊。
2.膠塞烘干后用2%氫氧化鈉溶液煮沸30分鐘(用過的膠塞只要用沸水處理30分鐘)，自來水洗凈，烘干。然后再泡入鹽酸液30分鐘，再用自來水，蒸餾水，三蒸水洗凈，烘干。最后裝入鋁盒內(nèi)高壓消毒，烘干備用。
3.膠帽，離心管帽烘干后只能在2%氫氧化鈉溶液中浸泡6-12小時(切記時間不能過長)，自來水洗凈，烘干。然后再泡入鹽酸液30分鐘，再用自來水，蒸餾水，三蒸水洗凈，烘干。最后裝入鋁盒內(nèi)高壓消毒，烘干備用。
4.膠頭可用75%酒精浸泡5分鐘，然后紫外照射后使用即可。
5.塑料培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)板，凍存管：
6.其他消毒方法：有的物品既不能干燥消毒，又不能蒸氣消毒，可用70%酒精浸泡消毒。塑料培養(yǎng)皿打開蓋子，放在超凈臺臺面上，直接暴露在紫外線下消毒。也可用氧化乙烯消毒塑料制品，消毒后需要用2—3周時間洗除殘留的氧化乙烯。用20000—100000rad的r射線消毒塑料制品效果。
為了防止清洗器材已消毒與末消毒發(fā)生混淆，可在紙包裝后，用密寫墨水作好標記。其法即用沾水筆或毛筆沾以密寫墨水，在包裝紙上作一記號，平時這種墨水不帶痕跡，一經(jīng)高溫，即出現(xiàn)字跡，從而可以判定它們是否消毒。密寫墨水的配制：氯化鉆(CoC12?6H2o)2g，30%鹽酸10m1，蒸餾水88m1。
注意事項：
1.嚴格執(zhí)行高壓鍋的操作規(guī)程：高壓消毒時，先檢查鍋內(nèi)是否有蒸餾水，以防高壓時燒干，水不能過多因為其將使空氣流暢受阻，會降低高壓消毒效果。檢查安全閥是否通暢，以防高壓時爆炸。
2.安裝濾膜時注意光面朝上：注意濾膜光滑一面是正面，要朝上，否則起不到過濾的作用。
3.注意人體的防護和器皿的完全浸泡：A.泡酸時要戴耐酸手套，防止酸液濺起傷害人體。B.從酸缸內(nèi)撈取器皿時防止酸液濺到地面，會腐蝕地面。C.器皿浸入酸液中要完全，不能留有氣泡，以防止泡酸不徹底。
![雙[三(羥甲基)氨基甲烷],CAS:6976-37-0](http://struc.chem960.com/strucimg/7000/ctzw0nzi34oyob9fnlmhiwee.png)
