【細(xì)胞培養(yǎng)】支原體污染來(lái)源及影響說(shuō)明

支原體（Mycoplasma）是一種大小介于細(xì)菌和病毒之間（0.1 - 0.6μm），沒有細(xì)胞壁、并獨(dú)立生活原核生物，形態(tài)呈高度多形性，呈圓形、絲狀或梨形。由于支原體直徑較小，進(jìn)行除菌過(guò)濾是，約1%的支原體可以直接穿過(guò)常規(guī)的0.22μm的微孔除菌濾膜，造成細(xì)胞的支原體污染。
支原體污染的來(lái)源包括：

（1）工作環(huán)境的污染，實(shí)驗(yàn)器材帶來(lái)的污染；

（2）操作者本身的污染（一些支原體在人體是正常菌群）；

（3）已受污染的培養(yǎng)基、血清，或用來(lái)制備細(xì)胞的原始組織或器官的污染；

（4）污染支原體的細(xì)胞造成的交叉污染。

目前，已發(fā)現(xiàn)的支原體品種有100多種，但根據(jù)國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，大約有二十多種支原體能污染細(xì)胞，有的細(xì)胞株可以同時(shí)污染兩種以上的支原體。

以下13種支原體污染在全部支原體污染中所占比例超過(guò)99%。（1）M. orale、（2）M.Arginini、（3）M.Hyorhinis、（4）A.Laidlawii、（5）M.Fermentans、（6）M. salivarium、（7）M.pirum、（8）M. hominis、（9）M. agalactiae、（10）M.bovis、（11）M. buccale、（12）M. arthritidis、（13）M. pulmonis。其中尤其是前四種：M.orale（口腔支原體）、M.arginini（精氨酸支原體）、M.hyorhinis（豬鼻支原體）和A.laidlawii（萊氏無(wú)膽甾原體）所占污染比例超過(guò)95%，前8種占比超過(guò)98%。

支原體通常附著在細(xì)胞的表面，并影響其宿主細(xì)胞的生理、遺傳等多方面的正常功能，用這些污染后貌似正常的細(xì)胞做試驗(yàn)或生產(chǎn)，將會(huì)嚴(yán)重影響結(jié)果。

1、對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖和形態(tài)的影響

細(xì)胞培養(yǎng)物被支原體污染后生長(zhǎng)減慢，且產(chǎn)生細(xì)胞病變（cytopathic effect, CPE），表現(xiàn)為細(xì)胞體積增大，碎片增多，在細(xì)胞質(zhì)中產(chǎn)生一些顆粒；細(xì)胞內(nèi)病毒繁殖受阻，使細(xì)胞形成空斑。光鏡下形成不正常密度生長(zhǎng)的單層，貼壁細(xì)胞形成“流沙樣”脫落、裂解。某些支原體可在侵入細(xì)胞８ｈ使線粒體膨脹，繼而被破壞，細(xì)胞核萎縮呈空泡化，細(xì)胞微管解聚，培養(yǎng)瓶中細(xì)胞與細(xì)胞間隙出現(xiàn)膜狀沉積，細(xì)胞無(wú)法傳代，甚至整個(gè)細(xì)胞群體溶解。

2、對(duì)細(xì)胞代謝和功能的影響

有些被污染后的細(xì)胞，雖形態(tài)上變化不明顯，但培養(yǎng)液pH變化較大，更換培養(yǎng)液后幾小時(shí)就變酸，培養(yǎng)基中的必需氨基酸被消耗掉，如谷氨酸或核苷前體，改變細(xì)胞代謝。

支原體吸附在細(xì)胞表面，破壞細(xì)胞膜的完整性，影響細(xì)胞信號(hào)傳遞；消耗細(xì)胞的核苷庫(kù)，引起細(xì)胞染色體異常；發(fā)酵型支原體能迅速降解簡(jiǎn)單糖類，代謝產(chǎn)生的酸能改變細(xì)胞的功能；利用精氨酸的支原體則發(fā)生精氨酸效應(yīng)，從而影響蛋白質(zhì)和核酸的合成、導(dǎo)致細(xì)胞的分裂和生長(zhǎng)受阻；引起細(xì)胞酶譜改變；由于支原體對(duì)細(xì)胞膜的吸附，干擾膜受體的功能，改變信號(hào)傳遞，破壞膜的完整性。在單克隆抗體制備中，骨髓瘤或雜交瘤細(xì)胞因支原體的污染而導(dǎo)致融合失敗或抗體分泌能力下降以至喪失。

3、引起染色體異常

改變?nèi)旧w組型，通?？蓪?dǎo)致細(xì)胞染色體斷裂、數(shù)目減少，出現(xiàn)雙著絲點(diǎn)染色體、環(huán)狀染色體等。

4、對(duì)免疫細(xì)胞產(chǎn)量的影響

支原體能影響巨噬細(xì)胞的活性，抑制干擾素的合成和降低其活性，加大了繼發(fā)感染其他細(xì)菌和病毒的幾率，同時(shí)，通過(guò)植物血凝素干擾淋巴細(xì)胞的刺激、分化。