質粒提取實驗常見問題分析

質粒提取常見問題分析

1、影響質粒提取的因素有哪些？

質粒提取的得率和質量與很多因素有關，如宿主菌的種類和培養(yǎng)條件、細菌細胞的裂解、質粒拷貝數(shù)、質粒的穩(wěn)定性、抗生素、吸附膜的吸附能力、提取操作的熟練程度等等。

2、為什么從革蘭氏陽性菌中提取質粒要在懸浮液中加入溶菌酶？

革蘭氏陽性菌有一層細胞壁，必須加入溶菌酶才能使之溶解。

3、如何根據實驗需要選擇不同級別的產品？

從純度上：各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR、測序、文庫篩選、連接和轉化，普通純度的質?？梢詽M足要求；而對于轉染實驗，則要求使用高純度質粒提取試劑盒方能滿足要求。

從提取的量上：1-20μg，應選擇小量提取試劑盒；20-40μg，應選擇中量提取試劑盒；大于40μg，應選擇大量提取試劑盒。

從宿主菌上：分為普通細菌質粒提取試劑盒、G+菌質粒提取試劑盒和酵母菌質粒提取試劑盒，根據情況進行選擇。