質(zhì)粒提取實驗常見問題分析

質(zhì)粒提取常見問題分析

1、影響質(zhì)粒提取的因素有哪些？

質(zhì)粒提取的得率和質(zhì)量與很多因素有關(guān)，如宿主菌的種類和培養(yǎng)條件、細菌細胞的裂解、質(zhì)粒拷貝數(shù)、質(zhì)粒的穩(wěn)定性、抗生素、吸附膜的吸附能力、提取操作的熟練程度等等。

2、為什么從革蘭氏陽性菌中提取質(zhì)粒要在懸浮液中加入溶菌酶？

革蘭氏陽性菌有一層細胞壁，必須加入溶菌酶才能使之溶解。

3、如何根據(jù)實驗需要選擇不同級別的產(chǎn)品？

從純度上：各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR、測序、文庫篩選、連接和轉(zhuǎn)化，普通純度的質(zhì)?？梢詽M足要求；而對于轉(zhuǎn)染實驗，則要求使用高純度質(zhì)粒提取試劑盒方能滿足要求。

從提取的量上：1-20μg，應(yīng)選擇小量提取試劑盒；20-40μg，應(yīng)選擇中量提取試劑盒；大于40μg，應(yīng)選擇大量提取試劑盒。

從宿主菌上：分為普通細菌質(zhì)粒提取試劑盒、G+菌質(zhì)粒提取試劑盒和酵母菌質(zhì)粒提取試劑盒，根據(jù)情況進行選擇。