單克隆抗體的制備原理說明

單克隆抗體是利用體外培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)的抗體，它由于是由一個細胞分裂而來的，所有只含有一種抗體。

單克隆抗體的優(yōu)點是：理化性狀高度均一、生物活性單一、與抗原結(jié)合的特異性強、便于人為處理和質(zhì)量控制，并且來源容易。這些優(yōu)點使其廣泛應用于抗腫瘤等領(lǐng)域，缺點就是生成的抗體只針對1種抗原決定簇，比較單一。

基本過程：

1.抗原的處理

2.在小鼠體內(nèi)植入抗原（免疫）

3.取免疫鼠的B淋巴細胞

4.與鼠的骨髓瘤細胞用PEG細胞融合

5.在多孔板上篩選。雜交瘤細胞就是上面的34兩步

原理1：單克隆抗體（MAb）與抗血清（又稱多克隆抗體，PAb）最主要的區(qū)別是MAb為單一種B細胞克隆所產(chǎn)生的一種均一的免疫球蛋白分子。所以MAb是B細胞克隆的標志，是一種獨特型的抗體，它的特異性是針對一個抗原決定簇的。制備單克隆抗體不能用化學分離的方法從多克隆抗體中去分離純化得到它，而是用分離產(chǎn)生抗體的B細胞克隆的方法得到它。為了使B細胞克隆能在體外人工培養(yǎng)下長期存活并產(chǎn)生完全均一的MAb，G．K?hler合Milstein于1975年創(chuàng)立了雜交瘤方法。所以制備單克隆抗體的技術(shù)又稱雜交瘤技術(shù)（hybredoma technique）。

雜交瘤技術(shù)的基本原理是用分泌抗體但不能長期培養(yǎng)的B細胞與能在體外長期培養(yǎng)并可低溫保存的腫瘤細胞進行雜交。篩選得到的雜交瘤細胞應該是既能分泌抗體又有瘤細胞的特性，可長期傳代培養(yǎng)，又可在液氮中保存的細胞。把這些細胞單克隆化，用單克隆化的雜交瘤細胞進行單克隆抗體的生產(chǎn)。

原理：最常用的單克隆抗體是小鼠的單抗，此外也有大鼠的和人源的單抗。人源單抗制備比較復雜。小鼠單抗的制備通常是使用Balb/c小鼠的B細胞和它的骨髓瘤細胞。大鼠的單抗制備通常用Lou/c大鼠及其骨髓瘤和Y3/AO大鼠及其骨髓瘤細胞。B細胞是從免疫動物的脾臟中分離出來的。動物免疫方法與抗血清制備相同，只是在制備脾臟前3d必須進行一次靜脈加強注射以保證得到的B細胞有旺盛的分泌抗體的活性。骨髓瘤細胞有許多細胞株是經(jīng)過誘變和篩選得到的缺陷型。篩選的標準是①瘤細胞本身不產(chǎn)生抗體或者產(chǎn)生抗體的某種鏈，但不能分泌；②是次黃嘌呤鳥嘌呤核苷酸轉(zhuǎn)移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶激酶（TK）的缺陷型。因為這種缺陷型的瘤細胞正常的核酸合成途徑被氨基喋吟（aminopterin）阻斷后，由于缺失這些酶，即使補充它的底物次黃嘌呤（H）和胸腺嘧啶（T），核酸合成的旁路也不能起到救援的作用，結(jié)果導致瘤細胞死亡（圖7—2）。而雜交瘤細胞因帶有B細胞的全套基因，在HAT存在的條件下借助于HGPRT和TK的作用通過替代的核酸合成途徑能正常合成DNA和RNA。所以雜交瘤能正常地生長繁殖而被選擇出來。未被融合的游離的B細胞只能存活3d而后自行死亡。這就是用HAT培養(yǎng)基進行選擇的原理。