麗春紅染色液的配制與使用

　　麗春紅（Ponceau S）也稱猩紅，可以用于PVDF膜、硝酸纖維素膜（nitrocellulose membrane）和醋酸纖維素膜（cellulose acetate membrane）上的蛋白的檢測。麗春紅帶負電荷，可以與帶正電荷的氨基酸殘基結(jié)合，同時麗春紅也可以與蛋白的非極性區(qū)相結(jié)合，從而形成紅色的條帶。麗春紅染色的靈敏度不及考馬斯亮藍染色。

　　麗春紅對蛋白的染色是可逆的，染色后可以用蒸餾水，PBS或其它適當(dāng)溶液洗去。因此，蛋白質(zhì)N端測序時將SDS-PAGE膠上的蛋白轉(zhuǎn)移到PVDF膜，用麗春紅染色后將目的條帶切下用于測序。

　　注意：麗春紅染色液不適用于尼龍膜上的蛋白的檢測。

　　麗春紅染色液的配制

　　常用的麗春紅染色液有兩種：一種用乙酸配制，另外一種用三氯乙酸（TVA）和5-磺基水楊酸（5-Sulfosalicylic acid）配制。配制方法如下：

　　一、用乙酸配制成分：0.1%（w/v）麗春紅，5%（v/v）乙酸，ddH2O。

　　4 ℃保存，不要凍上。也可以配成“0.2%（w/v）麗春紅，3%（v/v）乙酸，ddH2O”。

　　二、用三氯乙酸和5-磺基水楊酸成分：2% （w/v）麗春紅，30%的三氯乙酸，30%的5-磺基水楊酸。

　　麗春紅染色液使用說明

　　將PVDF膜、硝酸纖維素膜或醋酸纖維素膜浸沒在麗春紅染色液中，搖動5-10分鐘或更長時間；取出印跡膜，用蒸餾水，PBS或其它適當(dāng)溶液漂洗2-3次，可出現(xiàn)清晰條帶，記錄結(jié)果；用蒸餾水，PBS或其它適當(dāng)溶液漂洗2-3次，每次3-5分鐘，去除麗春紅，進行后續(xù)的WB檢測。

　　補充：麗春紅染色液也可以直接用來染PAGE膠，不過，在染色之前最好用甲醇-乙酸溶液浸泡一下PAGE膠，起到固定蛋白的作用。