如何看出細(xì)胞培養(yǎng)液體中存在支原體？

如何看出細(xì)胞培養(yǎng)液體中存在支原體？

1. 觀察細(xì)胞的形態(tài)和生長(zhǎng)特征:
支原體污染比較嚴(yán)重時(shí)可出現(xiàn)生長(zhǎng)減慢，有的培養(yǎng)基pH明顯變酸，并出現(xiàn)細(xì)胞病變，以此可依次對(duì)支原體污染進(jìn)行檢測(cè)，但有些情況下支原體污染引起的病變特征與病毒感染相似，因此不能準(zhǔn)確診斷。

2. 分離培養(yǎng)法:
大多數(shù)支原體可出現(xiàn)特有的典型菌落。因而可依次盡心檢測(cè)，該方法準(zhǔn)確、可靠，但時(shí)間長(zhǎng)，敏感性不夠高。

3. DNA結(jié)合熒光素染色法:
利用熒光染劑(bisbenzimide,Hoechst 33258)偵測(cè)支原體污染。熒光染料會(huì)結(jié)合到DNA之Adenosine-Thymidine (A-T) rich區(qū)域，因?yàn)橹гwDNA中A-T含量占多數(shù)(55~80%)，所以可將其染色而偵測(cè)。被支原體污染之細(xì)胞經(jīng)染色后，在細(xì)胞核外與細(xì)胞周圍可看到許多大小均一之熒光小點(diǎn)，即為支原體之DNA，證明有支原體之污染。