什么是核蛋白？核蛋白的提取方法介紹

核蛋白的簡介

核蛋白(nucleoprotein)因其最初發(fā)現(xiàn)于細(xì)胞核中，故稱為核蛋白，它是細(xì)胞中的一種結(jié)合蛋白質(zhì)。在細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)中都含有核蛋白。此外，在病毒、染色體和核蛋白體中也含有核蛋白。核蛋自在生物的生長和繁殖過程中有著獨(dú)特的功能和作用。

核蛋白是由帶陽離子性質(zhì)的堿性蛋白質(zhì)(如組蛋白和魚精蛋白)和蛋白質(zhì)輔基(核酸)所構(gòu)成。組蛋白含有堿性氨基酸(如賴氨酸和精氨酸)，所以具有堿性。其相對(duì)分子質(zhì)量為11 000～21 000。魚精蛋白存在于某些魚精核蛋白中，由于富含精氨酸，因此也具有堿性。

核蛋白的提取方法

柱式法 Minute TM 胞質(zhì)胞核分離試劑盒操作方法：

A． 懸浮細(xì)胞樣品（包括植物，細(xì)菌，酵母和真菌制備的原生質(zhì)體）

1.500Xg，3 分鐘低速離心收集細(xì)胞，用預(yù)冷的 PBS 清洗一次

2. 將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到 1.5 ml 離心管中，3000 rpm 離心 1-5 分鐘，棄去上清。

3. 加入適量的胞漿提取緩沖液（請(qǐng)注意樣品及裂解液的比例，以達(dá)到最佳效果）, 渦旋大力震蕩 15 秒, 冰上孵育 5 分鐘, 混勻. 接轉(zhuǎn)胞質(zhì)胞核分離步驟。

B. 貼壁細(xì)胞

1. 貼壁細(xì)胞生長至融合度 90-100%，將預(yù)冷的 PBS 直接加入細(xì)胞培養(yǎng)板，培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中清洗細(xì)胞兩次，吸去上清。

2. 將適量的胞漿提取緩沖液均勻的加入整個(gè)器皿表面，冰上靜置 5 分鐘。用吸頭吹打幾次后轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的 1.5 ml 離心管中。渦旋大力震蕩 15 秒。接轉(zhuǎn)胞質(zhì)胞核分離步驟。（請(qǐng)注意樣品及裂解液的比例，如濃度較低請(qǐng)減少裂解液使用量）

C．組織樣品

1. 稱重適量組織樣品，放入預(yù)冷的 1.5 ml 離心管中。

2. 用預(yù)冷的 PBS 清洗組織樣品一次。3000rpm 離心 1 分鐘，棄去上清，盡可能的使沉淀干燥。

3. 加入適量胞漿提取緩沖液，用微型管杵或微粉碎機(jī)勻漿，去除沒有完全勻漿的組織碎片。接轉(zhuǎn)胞質(zhì)胞核分離步驟。

胞質(zhì)胞核分離步驟

1. 4oC，最高速 (14000-16000 rpm) 離心 5 分鐘

2. 將上清液（上清為胞漿組份）轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的預(yù)冷的 1.5 ml 離心管中。將沉淀（可選優(yōu)化：用 0.5 ml 預(yù)冷 PBS 重懸，10000 rpm，離心 3-5 分鐘清洗沉淀可以減少胞漿蛋白污染）中加入適量的胞核提取緩沖液，渦旋大力震蕩 15 秒，冰上孵育 1 分鐘。

然后重復(fù)震蕩 15 秒，冰上孵育 1 分鐘四次。（如核蛋白提取濃度低，可適當(dāng)延長每次孵育及震蕩時(shí)間）

3. 迅速將核提取物轉(zhuǎn)入到預(yù)冷的離心管套管中，14000-16000 rpm，離心 30 秒。棄掉離心管柱。將核蛋白儲(chǔ)存于-80℃。一般產(chǎn)量 1.5-2.5 mg/ml。