培養(yǎng)基移種操作方法

一、斜面培養(yǎng)基移種技術(shù)

(1)材料

瓊脂斜面培養(yǎng)基

經(jīng)分離培養(yǎng)的平板培養(yǎng)物。

(2)方法

①在瓊脂斜面培養(yǎng)基試管上部標(biāo)明移種的菌名(或編號(hào))、接種日期、接種者的組別及代號(hào)。

②左手持長(zhǎng)有細(xì)菌的平板底，右手持接種環(huán)。接種環(huán)在火焰上滅菌冷卻后，沾取平板劃線上發(fā)育良好的孤立菌落。把平板放回原處，立即用此手取斜面培養(yǎng)基斜持，用右手小指與手掌夾持棉塞，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)后撥出棉塞，管口通過(guò)火焰滅菌。

③將已沾菌的接種環(huán)伸入斜面培養(yǎng)基的管底部的凝固水，沿斜面培養(yǎng)基的表面從底向上劃一直線，然后再?gòu)牡撞肯蛏蟿澾B續(xù)曲折線；也可不劃直線只劃曲折線。取出接種環(huán)，管口通過(guò)火焰滅菌，塞好棉塞，放試管架上，接種環(huán)火焰滅菌后放下。

向斜面培養(yǎng)基上移種的細(xì)菌如果是生長(zhǎng)在斜面培養(yǎng)基上的，或是生長(zhǎng)在液體培養(yǎng)基中的，則用左手同時(shí)斜持菌種管和斜面培養(yǎng)基兩個(gè)管，右手無(wú)名指、小指手掌同時(shí)拔起夾持二個(gè)棉塞。管口及接種環(huán)先經(jīng)火焰滅菌后，從菌種管取菌立即移種到斜面上，塞好棉塞，接種環(huán)火焰滅菌后放下。然后將斜面培養(yǎng)基放37℃恒溫箱中培養(yǎng)24h。結(jié)果斜面表面形成菌苔。

二、液體培養(yǎng)基移種技術(shù)

用于純種細(xì)菌的增菌及觀察細(xì)菌在液體環(huán)境中的生長(zhǎng)特征(混濁生長(zhǎng)，表面生長(zhǎng)或沉淀生長(zhǎng))

(1)材料

肉湯培養(yǎng)基

斜面培養(yǎng)物(大腸埃希菌、化膿性鏈球菌、枯草芽胞桿菌)

(2)方法

①取接種環(huán)在火焰上灼燒滅菌、冷卻。

②以“雙管移植法”左手持細(xì)菌斜面培養(yǎng)物和肉湯培養(yǎng)基兩支試管，右手持接種環(huán)，按無(wú)菌操作法取少量細(xì)菌，將沾菌的接種環(huán)在斜傾的接近液面的管壁上輕輕涂抹研勻，試管直立使沾附在管壁上的細(xì)菌沒(méi)入液體中，接種后放37℃恒溫箱中培養(yǎng)。

(3)結(jié)果

①渾濁生長(zhǎng)大腸埃希菌菌液呈均勻混濁，管底有少量沉淀。

②沉淀生長(zhǎng)化膿性鏈球菌菌液管底有沉淀，菌液無(wú)明顯渾濁。

③菌膜生長(zhǎng)枯草芽胞桿菌菌液表面形成膜狀物。

三、半固體培養(yǎng)基移種技術(shù)

用于保存菌種及間接檢查細(xì)菌有無(wú)動(dòng)力。

(1)材料

半固體培養(yǎng)基。

細(xì)菌斜面培養(yǎng)物。

(2)方法

①將接種針經(jīng)火焰滅菌冷卻后，從斜面培養(yǎng)物表面沾取細(xì)菌。

②用無(wú)菌法穿刺接種，將接種針刺入半固體培養(yǎng)基正中央，深度達(dá)距管底0.5cm處停止，然后循原路退出。注意在刺入及拔出時(shí)要保持接種針不向穿刺線外擺動(dòng)。

③試管口通過(guò)火焰滅菌，塞上棉塞。接種針經(jīng)火焰滅菌。培養(yǎng)物放37℃恒溫箱中培養(yǎng)。

(3)結(jié)果：有動(dòng)力的細(xì)菌呈擴(kuò)散生長(zhǎng)，無(wú)動(dòng)力的細(xì)菌沿穿刺線生長(zhǎng)。