小鼠抗人血紅蛋白單克隆抗體

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抗體標記簡介：
抗體標記是指將標記物（酶，熒光素，生物素等）共價連接到抗體上，與待檢測物（如某些特定抗原）特異性反應(yīng)形成多元復(fù)合物，并借助于熒光顯微鏡、射線測量儀、酶標檢測儀、電子顯微鏡和發(fā)光免疫測定儀等精密儀器對試驗結(jié)果直接鏡檢觀察或進行自動化測定，可以在細胞、亞細胞、超微結(jié)構(gòu)及分子水平上對抗原、抗體反應(yīng)進行定性和定位研究或應(yīng)用各種液相和固相免疫分析方法對體液中的半抗原、抗原進行定性和定量測定。目前抗體標記技術(shù)己被廣泛用于醫(yī)學(xué)病理學(xué)、免疫組織化學(xué)、分子生物學(xué)、生物制藥等領(lǐng)域的分析研究與技術(shù)測定，常見的抗體標記技術(shù)包括酶標記法，生物素化標記法，熒光素標記法和膠體金標記法等。

常用的抗體標記技術(shù)：

1.抗體的酶標記法
通過共價鍵經(jīng)適當方法將酶聯(lián)結(jié)在抗體上，制成酶標抗體，再借酶對底物的特異催化作用，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒，這些有色產(chǎn)物可用肉眼、光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡觀查，也可以用分光光度計測定，呈色反應(yīng)顯示了酶的存在，從而證明發(fā)生了相應(yīng)的免疫反應(yīng)。
實驗中使用偶聯(lián)劑使酶與抗體結(jié)合，即通過應(yīng)用單、雙或多功能試劑，分別與大分子的抗體所存在的功能性基團發(fā)生反應(yīng)，生成酶—抗體偶聯(lián)復(fù)合物。不同的酶—抗體復(fù)合物制備方法中，最廣泛應(yīng)用的戊二醛法，本法與其它偶聯(lián)方法相比，具有操作簡單、反應(yīng)條件溫和，及實用面廣等長處。
酶標記抗體的質(zhì)量主要取決于純度好、活性強及親和力高的酶和抗體，其次要有良好的制備方法。高質(zhì)量的抗體則可通過提取純化而獲得。在制備方法上，宜選用產(chǎn)率高、不影響結(jié)合物的活性和不混雜干擾性物質(zhì)且操作簡便易行的方法。

1) 辣根過氧化物酶(HRP)
辣根過氧化物酶（HRP）標記單抗和多克隆抗體的常用方法是過碘酸鈉法。其原理是HRP的糖基用過碘酸鈉氧化成醛基，加入抗體IgG后該醛基與 IgG氨基結(jié)合，形成Schiff氏堿。為了防止HRP中糖的醛基與其自身蛋白氨基發(fā)生偶合，在用過碘酸鈉氧化前先用二硝基氟苯阻斷氨基。氧化反應(yīng)末了，用硼氫化鈉穩(wěn)定Schiff氏堿。

2) 堿性磷酸酶（AKP）
堿性磷酸酶（AKP）用于標記抗體，常用戊二醛一步法，將酶和單抗混合，再加入適量戊二醛，使酶和抗體蛋白的NH2分別與兩個醛基結(jié)合，制備成結(jié)合物。該法簡便，但所得產(chǎn)物不均一，抗體活性損失大，酶標記率低。

2.抗體的生物素化標記
親和素與生物素都可與蛋白質(zhì)(包括抗原、抗體、酶等)、熒光素等分子結(jié)合而不影響后者的生物活性，是理想的標記劑。一個抗體分子可偶聯(lián)數(shù)十個生物素或親和素分子，而親和素或生物素分子又可與酶或熒光素結(jié)合，從而組成一個生物放大系統(tǒng)，顯著提高檢測的靈敏度。常用的有親和素--生物素標記法(Labeled avidin biotin，LAB)、親和素-生物素橋法(bridged avidin biotin, BAB)和親和素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物法(avidin biotin peroxid ase complex，ABC)。本實驗可使抗體或其它蛋白質(zhì)的ε-氨基通過手臂與?；纳锼毓矁r結(jié)合。其后，生物素化的分子可應(yīng)用酶標-親和素或熒光染料-鏈霉親和素復(fù)合物來檢測。

3.抗體的熒光標記法
熒光抗體標記技術(shù)是將熒光素以化學(xué)方法與特異性抗體共價結(jié)合，形成熒光素-蛋白質(zhì)結(jié)合物（即熒光標記抗體），此結(jié)合物仍保留著抗體活性，同時具有熒光素的示蹤作用。當它與相應(yīng)的抗原特異結(jié)合后，借助于熒光顯微鏡觀察呈現(xiàn)明亮的特異熒光。實驗中常用異硫qing基熒光黃（fluorescein isothiocyanate, FITC）作為標記物，在堿性溶液中，F(xiàn)ITC上的化學(xué)基團異硫qing基（-N=C=S）與抗體蛋白自由氨基（主要是賴氨酸的ε-氨基）結(jié)合，形成熒光抗體，以測定細胞相應(yīng)抗原的存在。FITC具有很高的量子產(chǎn)量（發(fā)射光與吸收光的比值,0 .85），而且形成的偶聯(lián)物的穩(wěn)定性很好。FITC是應(yīng)用最廣的熒光染料，流式細胞儀就按FITC的特性，設(shè)計了激光波長為488 nm,很接近于FITC的最大激發(fā)波長492nm）。

4.免疫膠體金標記抗體及檢測抗原
膠體金是一種常用的標記技術(shù)，是以膠體金作為示蹤標志物應(yīng)用于抗原抗體的一種新型的免疫標記技術(shù)，有其獨特的優(yōu)點。近年已在各種生物學(xué)研究中廣泛使用。在臨床使用的免疫印跡技術(shù)幾乎都使用其標記。同時在流式、電鏡、免疫、分子生物學(xué)以至生物芯片中都可能利用到。
膠體金在光鏡和電鏡中均為有效的標記物，可以檢測單一和多重抗原。膠體金在電解質(zhì)中不穩(wěn)定，但被蛋白質(zhì)包被的膠體金是穩(wěn)定的。一般常用免疫球蛋白或蛋白A包被膠體金，可作標記二抗進行免疫檢測，本方法應(yīng)用范圍廣，染色后的樣品可以長期保存。

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