維生素B1檢測(cè)試劑盒(熒光光度法)

產(chǎn)品名稱：維生素B1檢測(cè)試劑盒(熒光光度法)
規(guī)格：50T
分類：生化檢測(cè)
儲(chǔ)存條件: 4℃,避光,6個(gè)月
用途：定量檢測(cè)血清、血漿、動(dòng)植物組織等樣品中的維生素B1(硫胺素)含量。
注意事項(xiàng)：維生素B1(硫胺素)在堿性溶液中,被氧化成藍(lán)色熒光化合物硫色素,在紫外線下能發(fā)出熒光。激光波365nm發(fā)射光波435nm檢測(cè)熒光。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
維生素B1(VitaminB1)又稱硫胺素，屬于水溶性維生素，在有氧化劑存在時(shí)容易被氧化產(chǎn)生脫氫硫胺素，后者在有紫外光照射時(shí)呈現(xiàn)藍(lán)色熒光。
維生素B1檢測(cè)試劑盒(熒光光度法)是利用VitaminB1水溶液在堿性鹽溶液中能被氧化成藍(lán)色的硫色素(一種熒光化合物)，在紫外線下硫色素發(fā)出熒光，在激發(fā)波長(zhǎng)365nm，發(fā)射波長(zhǎng)435nm，在沒(méi)有其他熒光物質(zhì)干擾時(shí)熒光強(qiáng)度與硫色素的濃度呈正比，可定量檢測(cè)維生素B1的含量，如果樣品中存在干擾物質(zhì)，可用沸石吸附VitaminB1，以便去除待測(cè)樣品中干擾熒光測(cè)定的雜質(zhì)。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

自備材料：
1、蒸餾水
2、pH計(jì)
3、離心管或試管
4、正丁醇
5、熒光光度計(jì)

操作步驟(僅供參考):
1、稀釋組織勻漿液：按組織勻漿液(10×):蒸餾水=1：9的比例稀釋，獲得1×組織勻漿液。
2、稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：取適量的VitaminB1標(biāo)準(zhǔn)(100μg/ml)，按VitaminB2標(biāo)準(zhǔn)(100μg/ml)：蒸餾水=1：99稀釋成VitaminB1標(biāo)準(zhǔn)(1μg/ml)，4℃避光保存。
3、制備亞硫酸鹽工作液：取一支試劑(I)-亞硫酸鹽100mg粉末，充分溶解于0.5ml蒸餾水中配制成200mg/ml的亞硫酸鹽工作液，即配即用。
4、(選做)制備樣品：取待測(cè)材料如麥麩等，準(zhǔn)確稱量2~5g，加入研磨器內(nèi)，加入少量1×組織勻漿液，研磨碎，再次用1×組織勻漿液研磨，最后一并倒入50ml離心管，補(bǔ)充1×組織勻漿液至25ml，充分混勻，沸水中孵育30min，冷卻至室溫，用樣品校正液調(diào)節(jié)pH至4.5，3500g離心10min，取上清加入2g沸石，振搖30min，棄液，蒸餾水清洗沸石2次，棄洗液，加入2.5ml樣品洗脫液攪拌沸石，洗脫2~3次，將洗脫液合
5、VitaminB1氧化：按下表操作，注意避光操作。

加入物(ml)	空白管	測(cè)定管	標(biāo)準(zhǔn)空白管	標(biāo)準(zhǔn)管
VitaminB1標(biāo)準(zhǔn)(1μg/ml)	-	-	2.5	2.5
樣品凈化液	2.5	2.5	-	-
VitaminB1氧化液	1.5	0.9	1.5	0.9
VitaminB1檢測(cè)液	-	0.6	-	0.6
振搖15s
正丁醇	5	5	5	5
劇烈振搖90s，靜置分層，吸取下層溶液丟棄；上層溶液加入1.5g硫酸鹽 混勻使脫水。

 
計(jì)算：
VitaminB1含量(mg/100g)=(A測(cè)定-A空白)×S×N×100/｛(A標(biāo)準(zhǔn)-A標(biāo)準(zhǔn)空白)×m×1000｝
式中：A測(cè)定=測(cè)定管的熒光值
A空白=空白管的熒光值
S=標(biāo)準(zhǔn)管中VitaminB1含量（μg）
N=稀釋倍數(shù)
A標(biāo)準(zhǔn)=標(biāo)準(zhǔn)管的熒光值
A標(biāo)準(zhǔn)空白=標(biāo)準(zhǔn)空白管的熒光值
m=樣品的質(zhì)量(g)
注意事項(xiàng)：
1、在上述操作中，要嚴(yán)格避免VitaminB1受到陽(yáng)光直射。
2、待測(cè)樣品如不能及時(shí)測(cè)定，應(yīng)置于2~8℃保存，3天內(nèi)穩(wěn)定。
3、如果樣品濃度過(guò)高，應(yīng)用蒸餾水稀釋后重測(cè)，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。

并，并用樣品洗脫液定容至10ml，即為樣品凈化液。
VitaminB1氧化：按下表操作，注意避光操作。