葡聚糖凝膠LH-60

葡聚糖凝膠LH-60使用說(shuō)明書(shū)

葡聚糖凝膠LH系列是將葡聚糖凝膠羥丙基化，并且專門(mén)適合用于有機(jī)溶劑分離嗜脂性分子，天然產(chǎn)物在有機(jī)溶劑中的純化，例如類固醇，萜類化合物，脂質(zhì)和低分子量肽。
流動(dòng)相的常用溶劑為：水、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷。
上述溶劑的極性依次降低，對(duì)帶有極性的被分離物而言，保留值和分離度依次遞增；同理選用的凝膠柱高可依次降低，流速可以增大（或上樣量可以增加，樹(shù)脂體積在低極性溶劑中明顯收縮）。
溶劑的溶解性，極性，沸點(diǎn)，毒性都是要考慮到的，二氯甲烷通常對(duì)被分離物質(zhì)間的極性和堿性差異比較小時(shí)采用。甲醇通常對(duì)帶環(huán)狀(包括苯環(huán))物質(zhì)分離采用，葡聚糖凝膠LH-20對(duì)環(huán)狀物質(zhì)有強(qiáng)烈吸附，同時(shí)具備親水和親脂雙重性質(zhì)，且被分離物質(zhì)的極性在分離過(guò)程中起著重要作用。

1 填料的準(zhǔn)備
（1）葡聚糖凝膠LH-60以干粉形式存在，使用前必須溶脹，在膨脹期間應(yīng)避免過(guò)度攪拌，不要使用磁力攪拌器，溶脹的程度將取決于所使用的溶劑體系，在室溫條件下至少溶脹24個(gè)小時(shí)。
（2）將溶脹好的填料，所有的緩沖液等材料平衡至實(shí)驗(yàn)操作溫度。

2 裝柱
（1）檢查層析柱所有部件，特別是過(guò)濾網(wǎng)，密封圈，螺旋塞是否緊密，玻璃管是否干凈和完整。
（2）將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一小段液位，務(wù)必使底端無(wú)氣泡。
（3）用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開(kāi)柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。
（4）打開(kāi)蠕動(dòng)泵，讓緩沖液用使用時(shí)流速的1.33倍的流速流過(guò)，使柱床穩(wěn)定（注意壓力不要超過(guò)填料最大耐壓）。
注意：上述裝柱方法可用于葡聚糖凝膠LH-20在大多數(shù)溶劑中的填充。在一些溶劑中，例如氯仿，葡聚糖凝膠LH-60比溶劑密度小，并在其中漂浮，則需用其他方法。

3 平衡
上樣前平衡層析柱至少5-10個(gè)柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止。

4 上樣
樣品一定要離心或過(guò)濾后（0.45um濾膜）上樣。
樣品體積應(yīng)在總柱床體積的1-2％的范圍內(nèi)，視分離情況可以調(diào)整，柱高的選擇也與分離要求相關(guān)，柱長(zhǎng)越高，分離效果相應(yīng)越好，但是，柱高過(guò)高的凝膠層會(huì)引起較大的反壓，應(yīng)當(dāng)盡可能避免。難分離物質(zhì)要有一定柱高和流速控制。

5 洗脫
一般來(lái)說(shuō)，流速越低，分辨率越好。

6 再生
通常通過(guò)用5-10倍柱體積的洗脫液洗滌柱，如果改變條件，需要用新的洗脫液重新進(jìn)行平衡操作。

7 保存
未使用的填料，室溫密閉保存。使用完的填料，用純水將鹽分徹底沖洗，最后保存在20%乙醇中，4℃保存。

8 注意事項(xiàng)：
（1）上樣之前，樣品必須經(jīng)過(guò)膜過(guò)濾及去除色素，否則雜質(zhì)及色素會(huì)被吸附到填料上，影響填料的正常使用。所有的緩沖液均需要用0.45um的過(guò)濾器過(guò)濾。
（2）在使用過(guò)程中，避免使用高濃度的強(qiáng)酸強(qiáng)堿，酸和堿的濃度應(yīng)低于0.1摩爾。堿會(huì)使流速變慢。
（3）不同的樣品，吸附和洗脫方法不相同，可以根據(jù)相關(guān)的文獻(xiàn)進(jìn)行。