T4DNA連接酶

英文名稱(chēng)：T4 DNA Ligase

CAS號(hào)：9015-85-4

級(jí)別：BR

來(lái)源：本T4 DNA Ligase由大腸桿菌表達(dá)，表達(dá)基因的來(lái)源為T(mén)4嗜菌體。

活性定義：One unit is defined as the amount of enzyme required to give 50% ligation of HindIII fragments of lambda DNA in 30 min at 16℃ in 20 μl of the assay mixture containing 50 mM Tris, pH 7.5, 10 mM MgCl2, 10 mM DTT, 1 mM ATP, 25 μg/ml BSA and a 5'-DNA termini concentration of 0.12 μM (300 μg/ml)。

酶儲(chǔ)存溶液：20 mM Tris, pH 7.5, 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA and 50% (v/v) glycerol。

10X Ligation Buffer：400 mM Tris, pH 7.8, 100 mM MgCl2, 100 mM DTT, 5 mM ATP。

失活或抑制：65℃孵育10分鐘可以導(dǎo)致T4 DNA Ligase失活；NaCl或KCl濃度大于200mM時(shí)強(qiáng)烈抑制T4 DNA Ligase。

性狀：液體。該酶催化雙鏈DNA或RNA中毗鄰的5'磷酸基團(tuán)和3'-羥基末端之間形成磷酸二酯鍵，還可以修復(fù)雙鏈DNA、RNA或DNA/RNA復(fù)合體中的單鏈切口，連接DNA的粘性和平末端，但該酶對(duì)單鏈核酸無(wú)酶活性。該酶需要輔因子ATP

用途：生化研究。粘性末端或平末端雙鏈DNA的連接；雙鏈寡核苷酸接頭與雙鏈DNA連接；雙鏈DNA、RNA或DNA-RNA復(fù)合體中缺口的修復(fù)；連接酶介導(dǎo)的RNA檢測(cè)；位點(diǎn)特異性突變；擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性

保存： -20°C