WB實驗中——很難不愛預(yù)制膠！

相信從事生命科學(xué)研究領(lǐng)域的小伙伴對于Western Blot一定不陌生吧，這是一個步驟繁多的常用基礎(chǔ)實驗，其中電泳過程至關(guān)重要，稍有不慎我們就只能對著 「微笑線」和 「皺眉線」 嘆氣，而質(zhì)量好的電泳能讓目的條帶整齊，結(jié)果圖讓人眼前一亮。電泳的支持介質(zhì)為聚丙烯酰胺凝膠，該凝膠的聚合則由丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺單體在自由基的催化下完成。

丙烯酰胺介質(zhì)為網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，小孔尺寸與生物大分子具有相似的結(jié)構(gòu)，帶負(fù)電荷的蛋白，在電場的驅(qū)動下從電極負(fù)極向正極遷移。分子量大的蛋白滯留在上方，小分子蛋白繼續(xù)遷移，從而分離不同分子量的蛋白。

在實驗室中若要自行配制WB所需凝膠時需準(zhǔn)備很多試劑和材料，包括：ddH2O，30%丙烯酰胺混合液，1.5M Tris（pH 8.8），1.0M Tris（pH 6.8）,10%SDS，10%過硫酸銨，四甲基二乙胺(TEMED)等。其中丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺單體具有神經(jīng)毒性，作用具有累積性。APS也有一定毒性，對皮膚粘膜有刺激性和腐蝕性；眼、皮膚接觸可引起強烈刺激、疼痛甚至灼傷，長期皮膚接觸可引起變應(yīng)性皮炎；吸入后引起鼻炎、喉炎、氣短和咳嗽；口服則會引起腹痛、惡心和嘔吐。TEMED具有強神經(jīng)毒性，對粘膜和上呼吸道組織及皮膚有極大破壞作用，因此配置電泳凝膠必須注意個人防護(hù)，戴好各種防護(hù)裝置，如口罩、手套，并在通風(fēng)櫥中進(jìn)行，但依然常有很多研究人員因為實驗操作不慎而受傷中毒乃至影響到生命安危。

鑒于人們在自行配置中存在誤觸有毒試劑的風(fēng)險以及人工配制膠質(zhì)量的參差不齊，預(yù)制膠這個新興種子選手逐漸走入了大眾視野。
 
預(yù)制膠擁有以下優(yōu)點：

1. 即開即用，無需自行配制所需溶液、灌膠、等膠凝固，節(jié)省了科研人員寶貴的時間和精力；

2. 無需接觸其中具有積累性神經(jīng)毒性的試劑，大大降低了實驗的安全風(fēng)險；

3. 性能優(yōu)秀，分離能力強，分辨率高；

4. 大規(guī)模生產(chǎn)，膠與膠之間重復(fù)性好，質(zhì)量穩(wěn)定，不像手工配置膠那樣結(jié)果差異大；

5．超長保質(zhì)期：2-8℃可以穩(wěn)定保存一年；

隨著預(yù)制膠的逐漸推廣，有些商家更是推出了有如下買點的彩色凝膠試劑盒：

1. 彩色上層膠：可制備紅色或綠色上層膠，加樣孔清晰易辨，方便上樣及區(qū)分不同凝膠；

2. 配膠過程短：可快速配置一塊或多塊彩色PAGE凝膠，無需復(fù)雜計算及配置，只需將等體積凝膠溶液及緩沖液混合，并加入少許促凝劑即可，操作簡便；

3. 穩(wěn)定且環(huán)保：促凝劑無TEMED成分，避免難聞臭味，4度即可穩(wěn)定保存。凝膠均勻，彈性好，不易碎，電泳蛋白帶型美觀；

4. 條帶清晰：小分子蛋白條帶更清楚可見。

在預(yù)制膠里，由于丙烯酰胺已經(jīng)聚合成了聚丙烯酰胺，不再有毒性，徹底杜絕了丙烯酰胺對實驗人員可能造成的人體毒害。在國外，大多數(shù)實驗室都已開始使用預(yù)制膠，這使得蛋白電泳變得簡便，檢測更加快速，省去了自己配膠的諸多麻煩，實驗效率得到顯著提高。