實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)被污染的處理方法

實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)中常見的生物污染包括細(xì)菌污染、霉菌污染、支原體污染、黑點(diǎn)污染、真菌污染和原生動(dòng)物污染。

1.細(xì)菌污染

細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下呈黑色和細(xì)砂狀。根據(jù)感染菌的種類不同，可能會(huì)呈現(xiàn)不同的形狀，培養(yǎng)液一般會(huì)變得渾濁、黃色，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有明顯影響。

2.霉菌污染

正常情況下，培養(yǎng)基在 37℃ 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)兩三天，在倒置顯微鏡下仍保持透明，無雜質(zhì)。一旦出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)，顯微鏡下可見絲狀和團(tuán)塊狀漂浮物，菌絲明顯。此時(shí)，雖然細(xì)胞仍在生長(zhǎng)，但它們的生命狀態(tài)會(huì)在長(zhǎng)時(shí)間后逐漸惡化。

3.支原體污染

支原體是隱蔽的污染物，不能通過過濾去除。顯微鏡下沒有任何可見的支原體污染跡象，比如細(xì)胞病變和濁度或 pH 值變化（即使在嚴(yán)重污染的培養(yǎng)基中），這樣就會(huì)導(dǎo)致我們產(chǎn)生錯(cuò)誤的安全感。而在牛血清中，支原體是最常見的微生物之一。

4.黑點(diǎn)污染

黑色的游動(dòng)點(diǎn)能穿透濾膜并在空氣中擴(kuò)散。它們?cè)诘捅剁R下顯示為黑色圓點(diǎn)，在高倍鏡下顯示為可移動(dòng)的黑色斑點(diǎn)。培養(yǎng)液也不渾濁，一般影響較小，因此細(xì)胞仍可使用。通常，黑點(diǎn)污染后，細(xì)胞生長(zhǎng)良好，運(yùn)動(dòng)物體無明顯增加，培養(yǎng)基的顏色和透明度無明顯變化。在同一批血清培養(yǎng)的細(xì)胞中也可以發(fā)現(xiàn)類似的現(xiàn)象。

5.真菌污染

真菌污染后，培養(yǎng)基一般清澈，保持原色。細(xì)絲可以在顯微鏡下觀察到。最初，一些真菌類似于死細(xì)胞碎片，但其中許多清晰可見，看起來像珊瑚，比較容易區(qū)分。此外，它們會(huì)慢慢長(zhǎng)出細(xì)細(xì)的黑色細(xì)絲，因?yàn)樗鼈兩L(zhǎng)得比較慢，不像細(xì)菌那樣容易被發(fā)現(xiàn)，一旦發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基被污染，它們將很難存活。

6.原生動(dòng)物污染

原生動(dòng)物污染后，細(xì)胞培養(yǎng)基變得輕微渾濁。在顯微鏡下，大量的小點(diǎn)來回移動(dòng)。雖然此時(shí)細(xì)胞仍能生長(zhǎng)，但繁殖速度減慢，細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)不好，邊緣不清，變得不透明。原生動(dòng)物與細(xì)胞形成共生關(guān)系。同時(shí)，原生動(dòng)物與細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)。這種共生現(xiàn)象非常普遍，但以細(xì)胞為主，因?yàn)樵鷦?dòng)物的數(shù)量相對(duì)較少，因而對(duì)細(xì)胞的正常生長(zhǎng)沒有影響，只有當(dāng)它們達(dá)到一定數(shù)量時(shí)，才最終爆發(fā)成為惡性循環(huán)。

細(xì)胞培養(yǎng)過程中細(xì)胞受到污染的原因：

1，取放細(xì)胞時(shí)引起的污染

細(xì)胞培養(yǎng)過程中，取放細(xì)胞是基本的操作，培養(yǎng)房開關(guān)門的瞬間，環(huán)境中的微生物或多或少會(huì)進(jìn)入培養(yǎng)箱中，而且內(nèi)外溫差導(dǎo)致內(nèi)門冷凝水的產(chǎn)生，極易吸附微生物，都是造成培養(yǎng)箱污染的風(fēng)險(xiǎn)因素。

2，滅菌不徹底造成的二次污染

細(xì)胞培養(yǎng)過程中，因其它操作問題（如培養(yǎng)基潑灑，水盤污染等），造成培養(yǎng)房的大規(guī)模污染也時(shí)常會(huì)發(fā)生，此時(shí)就需要對(duì)培養(yǎng)箱進(jìn)行滅菌消毒，常規(guī)的消毒（如紫外照射）只能達(dá)到表面消毒的效果，特別是對(duì)真菌等頑固性污染，無法進(jìn)行徹底滅菌，導(dǎo)致后續(xù)培養(yǎng)過程中細(xì)胞污染頻發(fā)。