大腸桿菌菌株的分型及區(qū)別簡介

　　1：DH5a菌株

　　DH5a是一種常用于質(zhì)?？寺〉木?。E.coliDH5a在使用pUC系列質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)化時，可與載體編碼的β－半乳糖苷酶氨基端實現(xiàn)α－互補?？捎糜谒{白斑篩選鑒別重組菌株。

　　基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA1

　　2：BL21(DE3)菌株

　　該菌株用于高效表達克隆于含有噬菌體T7啟動子的表達載體（如pET系列）的基因。T7噬菌體RNA聚合酶位于λ噬菌體DE3區(qū)，該區(qū)整合于BL21的染色體上。該菌適合表達非毒性蛋白。

　　基因型：F-，ompT，hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3）

　　3：BL21(DE3)pLysS菌株

　　該菌株含有質(zhì)粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表達T7溶菌酶的基因，能夠降低目的基因的背景表達水平，但不干擾目的蛋白的表達。該菌適合表達毒性蛋白和非毒性蛋白。

　　基因型：F-，ompThsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3，pLysS，Camr

　　4：JM109菌株

　　該菌株在使用pUC系列質(zhì)粒載體進行DNA轉(zhuǎn)化或用M13phage載體進行轉(zhuǎn)染時，由于載體DNA產(chǎn)生的LacZa多肽和JM09編碼的LacZΔM15進行α－互補，從而顯示β－半乳糖苷酶活性，由此很容易鑒別重組體菌株

　　基因型：recA1，endA1，gyrA96，thi－1，hsdR17，supE44，relA1，Δ（lac－proAB）/F’

　　5：TOP-/10菌株

　　該菌株適用于高效的DNA克隆和質(zhì)粒擴增，能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定遺傳。

　　基因型：F-，mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)，φ80，lacZΔM15，△lacⅩ74，recA1，araΔ139Δ(ara-leu)7697，galU，galK，rps，(Strr)endA1，nupG

　　6：HB101菌株

　　該菌株遺傳性能穩(wěn)定，使用方便，適用于各種基因重組實驗

　　基因型：supE44，hsdS20（rB-mB－），recA13，ara－14，proA2，lacY1，galK2，rpsL20，xyl-5，mtl-1，leuB6，thi-1M110或SCS110

　　大多數(shù)大腸桿菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶，前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基，后者在CCA/TGC序列的第一個胞嘧啶C-5位置上引入甲基。常用的菌株都會產(chǎn)生dam,dcm，從而受到甲基化的影響.部分限制性內(nèi)切酶對甲基化的DNA不能切割，如FbaI和MboI等，一般生物公司提供的內(nèi)切酶說明中均有說明。大多數(shù)酶切位點的甲基化不影響切割，而有些會影響，如XbaI,BclI等。而且甲基化只發(fā)生在特定序列，以XbaI為例，只有在位點序列旁出現(xiàn)GA或TC，該XbaI位才會被甲基化。而要解除這種限制修飾作用通常有兩種方法：

　?。?）選用上述酶的同功酶，如Sau3AI，DNA識別切割位點與MboI相同；但不受甲基化影響；

　?。?）利用甲基化酶缺失的受體細胞進行DNA的制備，如E.coliJM110和鏈霉菌等，前者Dam和Dcm甲基化酶已敲出，而后者細胞內(nèi)本就沒有甲基化酶，從這些細胞中抽提的DNA就能被上述酶切割。