動物細胞培養(yǎng)基本要求與操作步驟

細胞培養(yǎng)技術(shù)已經(jīng)成為當今生命科學(xué)各領(lǐng)域的基礎(chǔ)技術(shù)和基本技能，它也是細胞工程、基因工程和生物醫(yī)學(xué)工程的重要研究手段。那我們在實際的動物細胞培養(yǎng)實驗中需要注意哪些基本要求呢？
 

1、實驗前準備

實驗前必須分門別類地制訂操作卡片，如清洗卡、消毒卡、細胞常用液（細胞培養(yǎng)液、BSS液、消化液）配制卡、牛血清檢測分裝卡、細胞原代和傳代操作卡等。各卡片上注明實驗所需器材的名稱、規(guī)格、數(shù)量、操作要領(lǐng)和實驗注意事項等。實驗前應(yīng)按卡片收集、清點所需用品，一并放入超凈臺內(nèi)，這樣可避免操作時因物品不全而往返拿取所浩成的污染。同時，根據(jù)每個實驗的要求，準備好瓶管支架器械消毒盒等。實驗器材準數(shù)要大于實驗使用數(shù)，瓶蓋數(shù)要大于瓶數(shù)。這樣才能有條不紊地做實驗，也減少了忙亂操作所引起的污染。

2、無菌室和操作室消毒

無菌室內(nèi)每周用乳酸蒸氣（或過氧乙酸）加紫外線消毒1~2次。實驗前，將實驗器材放入超凈臺內(nèi)，打開超凈臺紫外線燈，同時啟動超凈臺風機，40 min后消毒完畢，關(guān)閉紫外線燈。這樣，超凈臺內(nèi)空氣被凈化，超凈臺面構(gòu)成相對無菌的環(huán)境。

3、無菌操作要求

①手指不能觸及器材使用端。如觸及，器材需更換或燒灼后再使用（如瓶口）。

②減少手與器材的接觸面，學(xué)會手指操作。

③一切操作，如打開或封閉瓶口，安裝吸管、注射器等，都要在火焰前方進行。瓶口、吸管、注射器使用前要經(jīng)過火焰消毒后使用。

④瓶口順風斜放在支架上。試劑用后立即封閉瓶口。瓶口長時間敞開會增加落菌的機會。

⑤不同的細胞同時操作時，要專管專用，并要勤換吸管，防止擴大污染和交叉污染。

⑥瓶口液滴不能倒回瓶內(nèi)。液滴用干酒精棉球擦拭，瓶口再經(jīng)火焰消毒。

⑦操作者動作要準確敏捷，盡量避免空氣流動。

4、實驗中操作要求

洗手、著裝與外科臨床要求相同。雙手用肥皂洗凈后浸泡于消毒液中，并用75%的酒精擦拭。細胞培養(yǎng)用液從冰箱取出，試劑瓶口和外壁經(jīng)灑精外布擦洗后人超凈臺，超凈臺面要用酒精紗布擦拭。超凈臺上的物品面布局合理，污染廢液缸、酒精棉球缸在右側(cè)位，酒精燈在中央位，試劑瓶在左側(cè)位。拆除大包裝，點燃灑精燈（95%灑精）、火焰無色或微黃色表示酒精雜質(zhì)少，酒精燃燒完全（不能使用廢酒精或工業(yè)酒精，這類酒精燃燒時產(chǎn)生的化學(xué)物質(zhì)易附著到吸管或其他瓶、皿上，帶入培養(yǎng)液中會傷害細胞）。

浸泡75%酒精中的金屬器械用臺面消毒鑷子取出，經(jīng)無菌干紗布擦拭后，迅速通過火焰（器械不能在火焰中灼燒過長時間），冷卻后使用，避免燙傷細胞。細胞培養(yǎng)液、牛血清、酶液的吸管，使用后不能再用火焰消毒，因為吸管中殘留的培養(yǎng)液被燒焦碳化，再使用時，會把有害碳化物帶入培養(yǎng)液中毒害細胞。操作中手指被污染時，可用酒精紗布或棉球擦拭。在實驗過程中，不要面向操作臺講話或咳嗽，避免將唾沫中微生物帶入超凈臺內(nèi)，污染空氣。實驗者離開超凈臺時，立即用肘關(guān)節(jié)關(guān)閉側(cè)窗口，避免無菌室內(nèi)細菌隨空氣流入凈化操作區(qū)。

5、實驗后要求

實驗完畢，關(guān)閉超凈臺風機和電源，未使用過的器材放入飯盒內(nèi)，用過的玻璃器材投入清水中浸泡，包裝紙疊卷，繩成束分類歸人，最后，超凈臺面用酒精紗布或棉球擦拭，紫外線消毒。

6、注意事項

無菌操作離不開火和酒精，操作中避免事故發(fā)生。要用打火機點火?；鸩顸c火時，火星熄滅后投入廢缸內(nèi)（缸內(nèi)有廢酒精棉球）。酒精濺出臺面或瓶外壁時，立即擦干；一旦發(fā)生著火事故，立即關(guān)閉超凈臺風機，用飯盒、濕布撲滅火焰。