植物組織培養(yǎng)基配置的關(guān)鍵環(huán)節(jié)說明

以MS培養(yǎng)基為例,其母液的配制包括大量元素、微量元素、鐵鹽、維生素、氨基酸、植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)和有機附加物等種類。

1、 大量元素和微量元素母液的配制

按規(guī)定用量,稱取所需的各種藥品,在配制時為減少工作量,可以把幾種藥品（如大量元素或微量元素）配在同一母液中。但由于各種藥品的混合,可能發(fā)生反應(yīng),生成沉淀物,以致母液失效。為避免類似現(xiàn)象發(fā)生,在大量元素、微量元素和維生素及氨基酸的母液配制時,可采用如下2種做法加以解決：①將要配在同一母液的大量元素、微量元素和維生素及氨基酸等化合物,按先后順序溶解藥品,待前一種藥品完全溶解后再加入后一種化學(xué)藥品,以此類推；②使每種成份分別完全溶解,再把它們彼此混合。

2、 鐵鹽母液的配制

鐵鹽的成份含硫酸亞鐵（FeSO4·7H2O）和乙二胺四乙酸二鈉（Na2-EDTA）。這兩種化合物的溶解和混合較為嚴(yán)格,必須按如下方法配制,否則將會產(chǎn)生沉淀。該方法是：分別溶解FeSO4·7H2O和 Na2-EDTA,加熱并不斷攪拌,使之完全溶解,冷卻,將2種溶液混合,調(diào)PH至5.5,用蒸溜水加至所需容積,棕色瓶保存于冰箱之中。

3、 植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)母液的配制

植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)是培養(yǎng)基的重要組分之一,一般是植物激素類物質(zhì),如生長素類的IAA、IBA、NAA,赤霉素類的GA3,細胞分裂素類的2,4-D、KT和6-BA等。由于大多數(shù)生長調(diào)節(jié)物質(zhì)難溶于水,因此配制方法也各不相同：①IAA,IBA和GA3先用少量95%酒精溶解,再加水定容,搖勻后貯于試劑瓶中、貼上標(biāo)簽后,存放在冰箱中；②NAA可用熱水或少量95%酒精溶解,再加水定容至所需容積；③2,4-D可溶于少許1mol/L的NaOH溶液中,然后加水定容；④KT和6-BA可用少量1mol/L的HCl溶解,再加水定容；⑤玉米素先溶于少量95%酒精中,然后加水定容。

植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)濃度通常用ppm（mg/ml）和mol/L表示,在配制母液時,常以ppm較為方便,一般配制成0.5ppm的母液,這個濃度既便于計算,也可避免冷藏時形成結(jié)晶。

4、 有機附加物母液的配制

在植物組織培養(yǎng)時,培養(yǎng)基中往往要加入一些有機附加物,如椰子汁,以促進組織培養(yǎng)活性。由于椰子汁的活性成分是耐熱的,在配制時,要先把由果實中采集到的汁液加熱煮沸以除去其中的蛋白質(zhì),過濾,然后置塑料瓶中貯存于的-20℃的低溫冰箱內(nèi)。