肥大細(xì)胞（甲苯胺藍(lán)）染色液的操作步驟

肥大細(xì)胞(Mast cell)是疏松結(jié)締組織內(nèi)常見的細(xì)胞，常成群的沿著小血管和淋巴管分布，也常見于支氣管和胰腺的小葉間導(dǎo)管周圍，一般細(xì)胞較大，直徑約為20-30μm，呈圓形或橢圓形，胞核較小、胞質(zhì)內(nèi)充滿粗大且具有異染性嗜酸性顆粒。

甲苯胺藍(lán)(Toluidine Blue O)中的陽離子有染色作用, 組織細(xì)胞的酸性物質(zhì)與其中的陽離子相結(jié)合而被染色。甲苯胺藍(lán)還含有兩個助色團(tuán)，能促使染料產(chǎn)生電離成鹽類, 幫助發(fā)色團(tuán)對組織產(chǎn)生染色力, 使切片上的組織細(xì)胞著色，可染細(xì)胞核使之呈藍(lán)色。肥大細(xì)胞顆粒呈紫紅色，其他呈藍(lán)色。

操作步驟

取新鮮組織立即固定于10%中性福爾馬林固定液中，常規(guī)脫水包埋。

切片厚度4-5μm，常規(guī)脫蠟至水。

系列乙醇各1min，自來水洗2min。

入Toluidine Blue O Stain，浸染15～30min。

自來水稍洗。

TBO分化液分化，直至細(xì)胞核和顆粒清晰，可在顯微鏡下控制。

自來水稍洗，濾紙吸干或吹風(fēng)機吹干水分。

95%乙醇1min，無水乙醇2次，每次2min。

二甲苯透明，中性樹膠封固。

染色結(jié)果：

肥大細(xì)胞顆粒 紫藍(lán)色

背景 淡藍(lán)色

注意事項：

針對于胃粘膜組織、軟骨組織等較難著色組織的染色，浸染于甲苯胺藍(lán)染色液的時間應(yīng)相應(yīng)延長。

應(yīng)注意組織要新鮮，取出后立即固定。

甲苯胺藍(lán)染色后不宜采用低濃度乙醇脫水，否則容易導(dǎo)致褪色。

分色后應(yīng)快速入95%乙醇、無水乙醇、二甲苯的時間不宜過久，否則容易導(dǎo)致褪色。