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細胞鋪板不均勻?遠慕教你解決方法!

2023-05-05 10:52 來源:上海遠慕生物試劑
做細胞生物學實驗,細胞鋪板大概是我們最常見的一個實驗。但有時候鋪得不是很均勻:下面為大家分享幾點經驗。
1、盡量消化細胞分散成單細胞懸液。對于易于消化的細胞,我一般DPBS清洗一遍,加0.5ml胰酶潤洗一遍(25cm2培養(yǎng)瓶或6孔板),棄掉胰酶,37度消化2-3分鐘或室溫消化5min左右,鏡下觀察是否細胞消化較為分散。

2、96孔板一般以100 微升每孔接種,直接用100 微升移液器吸取細胞懸液,沿孔壁(稍離開一點孔底即可,不要離底太高)直接接入,移液器不需完全打到最大,輕輕按下即可,每鋪完一行換一次槍頭同時輕輕混勻細胞懸液。都加完后蓋上蓋子,左手輕輕扶住板的左邊,右手輕輕敲擊板的右邊緣,注意把握力度(我一般輕巧敲三下),太強或次數(shù)太多會導致細胞集中成堆,將板順時針旋轉(逆時針效果不好),依次敲擊剩余三個邊,靜置約5分鐘,放入37度培養(yǎng)箱。

3、6孔板、12孔板或24孔板,可采用將每個孔加入少量無血清培養(yǎng)基,晃動浸潤整個孔底,然后用移液槍吸至第二孔,同樣方法浸潤孔底,其它孔依此類推,這樣整個孔底都是濕潤的,細胞懸液會平鋪在整個孔底,注意加完細胞懸液后要放工作臺靜置一下。這個方法就是有點慢,但操作熟練了也不慢。也可以采用輕拍的方式,但力度沒有96孔板好掌握,效果沒有96孔板好。

4、培養(yǎng)瓶里面加好細胞以后(比如傳代好/分好細胞以后),先順時針搖晃3次,馬上逆時針搖晃3次。然后延X軸Y軸分別水平搖動3次。放入CO2培養(yǎng)箱后,平放著培養(yǎng)瓶重復延X軸Y軸分別水平搖動3次。
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